| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩写词表 | 第10-11页 |
| 第一章文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 丹参概述 | 第11页 |
| 1.2 丹参的药用成分 | 第11-12页 |
| 1.2.1 丹参酮类化合物 | 第11-12页 |
| 1.2.2 丹酚酸类化合物 | 第12页 |
| 1.3 丹参次级代谢物合成途径 | 第12-15页 |
| 1.3.1 丹酚酸合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3.2 丹参酮合成途径 | 第13-15页 |
| 1.4 丹参发根技术 | 第15-16页 |
| 1.5 植物次生代谢工程 | 第16-17页 |
| 1.5.1 单基因或多基因共转化策略 | 第16页 |
| 1.5.2 基因干扰或敲除策略 | 第16-17页 |
| 1.5.3 转录调控因子策略 | 第17页 |
| 1.5.4 转运子策略 | 第17页 |
| 1.6 转录因子调控次生代谢 | 第17-19页 |
| 1.6.1 转录因子在生物碱代谢调控中的作用 | 第18页 |
| 1.6.2 转录调控因子在萜类代谢中的作用 | 第18页 |
| 1.6.3 转录因子在苯丙烷类及其衍生物代谢调控中的作用 | 第18-19页 |
| 1.7 ERF类转录因子 | 第19页 |
| 1.8 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒与菌种 | 第21页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 购买的试剂与药品 | 第22-23页 |
| 2.1.5 常用试剂及配置方法 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-45页 |
| 2.2.1 快繁丹参无菌苗 | 第24页 |
| 2.2.2 丹参Sm ERF2、Sm O3L3基因的克隆 | 第24页 |
| 2.2.3 进化树建立及多重序列比对 | 第24页 |
| 2.2.4 Sm ERF2、Sm O3L3亚细胞定位 | 第24-29页 |
| 2.2.5 RNA提取、浓度检测及反转录 | 第29-31页 |
| 2.2.6 植物表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 2.2.7 农杆菌介导遗传转化 | 第33-34页 |
| 2.2.8 基因整合鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.9 转基因丹参发根和再生植株q RT-PCR分析 | 第35-38页 |
| 2.2.10 转基因丹参毛状根和再生植株有效成分检测 | 第38-39页 |
| 2.2.11 酵母单杂实验 | 第39-43页 |
| 2.2.12 Sm ERF2和Sm O3L3遗传转化模式植物拟南芥 | 第43-44页 |
| 2.2.13 灰霉菌侵染实验 | 第44-45页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第45-82页 |
| 3.1 Sm ERFs基因克隆 | 第45页 |
| 3.2 Sm ERF2、Sm O3L3序列的生物信息学分析 | 第45-46页 |
| 3.3 Sm ERF2、Sm O3L3亚细胞定位 | 第46-50页 |
| 3.3.1 亚细胞定位表达载体构建 | 第46-48页 |
| 3.3.2 生物信息学分析Sm ERF2、Sm O3L3亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 3.3.3 激光扫描共聚焦显微镜观察 | 第49-50页 |
| 3.4 诱导子诱导丹参毛状根及丹参植株各器官RNA提取 | 第50-51页 |
| 3.5 组织表达谱分析 | 第51页 |
| 3.6 诱导表达谱分析 | 第51-53页 |
| 3.7 植物表达载体构建 | 第53-57页 |
| 3.7.1 p CAMBIA2300+-Sm ERF2、p CAMBIA2300+-Sm O3L3的构建 | 第53-55页 |
| 3.7.2 p HB-Sm ERF2-RNAi,p HB- Sm O3L3-RNAi的构建 | 第55-57页 |
| 3.8 农杆菌C58C1介导的丹参外植体转化及毛状根获得 | 第57-58页 |
| 3.9 丹参发根和再生植株的基因整合鉴定 | 第58-62页 |
| 3.9.1 丹参发根和再生植株的基因组DNA提取 | 第58页 |
| 3.9.2 p CAMBIA2300+转基因毛状根和再生植株的 PCR 阳性克隆鉴定 | 第58-59页 |
| 3.9.3 p CAMBIA2300+-Sm ERF2、p CAMBIA2300+-Sm O3L3转基因发根的PCR阳性克隆鉴定 | 第59-61页 |
| 3.9.4 p HB-Sm ERF2-RNAi，p HB- Sm O3L3-RNAi转基因毛状根和再生植株的PCR阳性鉴定 | 第61-62页 |
| 3.10 转基因毛状根的QRT-PCR分析及含量测定 | 第62-77页 |
| 3.10.1 pCAMBIA2300+-SmERF2 毛状根转录水平检测及丹参酮含量测定 | 第62-65页 |
| 3.10.2 p HB-Sm ERF2RNAi毛状根丹参酮合成关键酶基因表达分析及丹参酮含量测定 | 第65-66页 |
| 3.10.3 pCAMBIA2300+-SmERF2 毛状根转录水平分析及丹酚酸含量测定 | 第66-68页 |
| 3.10.4 p HB-Sm ERF2RNAi毛状根丹酚酸合成关键酶基因表达分析及丹酚酸含量测定 | 第68-70页 |
| 3.10.5 p CAMBIA2300+-Sm O3L3 毛状根转录水平分析及丹参酮含量测定 | 第70-72页 |
| 3.10.6 p HB-Sm O3L3RNAi毛状根丹参酮合成关键酶基因表达分析及丹参酮含量测定 | 第72-73页 |
| 3.10.7 p CAMBIA2300+-Sm O3L3毛状根转录水平分析及丹酚酸测定 | 第73-75页 |
| 3.10.8 p HB-Sm O3L3RNAi毛状根丹酚酸合成关键酶基因表达分析及丹酚酸含量测定 | 第75-77页 |
| 3.11 酵母单杂实验 | 第77-80页 |
| 3.11.1 p Lacz2U表达载体构建 | 第77页 |
| 3.11.2 p B42AD载体构建 | 第77-79页 |
| 3.11.3 Sm ERF2/Sm O3L3与BOX相互作用 | 第79-80页 |
| 3.12 Sm ERF2转化拟南芥 | 第80-82页 |
| 3.12.1 转基因拟南芥PCR阳性鉴定 | 第80-81页 |
| 3.12.2 转基因拟南芥q RT-PCR | 第81-82页 |
| 第四章 研究总结和展望 | 第82-85页 |
| 4.1 研究总结 | 第82-84页 |
| 4.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 论文及成果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 附件 | 第94页 |
