| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-26页 |
| 1 结核分枝杆菌DNA拓扑异构酶 | 第10-13页 |
| 1.1 结核病全球流行 | 第10页 |
| 1.2 DNA拓扑异构酶的主要类群 | 第10-11页 |
| 1.3 分枝杆菌DNA拓扑异构酶研究进展 | 第11-13页 |
| 2 结核分枝杆菌DNA修复 | 第13-19页 |
| 2.1 DNA的损伤和修复 | 第13-14页 |
| 2.2 细菌3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶的结构 | 第14-15页 |
| 2.3 哺乳动物3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶(MAG或AAG) | 第15-16页 |
| 2.4 3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶的底物 | 第16-18页 |
| 2.5 3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶在细胞中的作用 | 第18页 |
| 2.6 细胞对3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶的调控 | 第18-19页 |
| 3 核糖的代谢 | 第19-24页 |
| 3.1 核糖的代谢及其重要性 | 第19页 |
| 3.2 概述RK家族系列蛋白 | 第19-20页 |
| 3.3 核糖激酶的结构 | 第20-21页 |
| 3.4 核糖激酶的生化性质 | 第21-22页 |
| 3.5 RK底物的特异性 | 第22-23页 |
| 3.6 无机磷酸盐调控RK | 第23-24页 |
| 3.6.1 RK依赖磷酸盐或者五价离子 | 第23页 |
| 3.6.2 NXXE motif对RK的激活作用 | 第23-24页 |
| 3.7 RK的基因结构 | 第24页 |
| 4 本课题的意义、内容和研究目标 | 第24-26页 |
| 4.1 课题意义 | 第24页 |
| 4.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 4.3 研究目标 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第26-37页 |
| 1 实验材料 | 第26-31页 |
| 1.1 供实验菌株和质粒 | 第26-28页 |
| 1.1.1 实验所用菌株 | 第26-27页 |
| 1.1.2 实验所用质粒 | 第27-28页 |
| 1.2 培养基和抗生素 | 第28页 |
| 1.3 试剂和溶液配制 | 第28-30页 |
| 1.3.1 试剂 | 第28-29页 |
| 1.3.2 溶液配制 | 第29-30页 |
| 1.4 PCR引物及DNA底物 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-37页 |
| 2.1 分子生物学基本操作 | 第31页 |
| 2.2 细菌双杂交筛选(Bacterial two-hybrid) | 第31页 |
| 2.3 糖苷水解酶实验(glycosylase assay) | 第31页 |
| 2.4 SPR分析实验 | 第31-32页 |
| 2.4.1 试剂的配制 | 第31-32页 |
| 2.4.2 实验步骤 | 第32页 |
| 2.5 解螺旋反应实验 | 第32-33页 |
| 2.5.1 TopA反应缓冲液的配制 | 第32页 |
| 2.5.2 pBlu质粒的准备 | 第32-33页 |
| 2.5.3 反应过程 | 第33页 |
| 2.6 纤维素薄层层析实验 | 第33页 |
| 2.7 免疫共沉淀实验 | 第33-34页 |
| 2.7.1 细胞溶胞液制备 | 第33-34页 |
| 2.7.2 细胞溶菌产物预处理 | 第34页 |
| 2.7.3 抗体的制备 | 第34页 |
| 2.7.4 免疫沉淀 | 第34页 |
| 2.8 随机突变实验 | 第34-35页 |
| 2.9 RT-PCR实验 | 第35-36页 |
| 2.9.1 耻垢分枝杆菌生长曲线的测定 | 第35页 |
| 2.9.2 抽提RNA | 第35页 |
| 2.9.3 反转录 | 第35-36页 |
| 2.9.4 实时定量PCR | 第36页 |
| 2.10 DNA底物的同位素标记 | 第36页 |
| 2.11 蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| 第三章 研究结果和分析 | 第37-63页 |
| 1 细菌双杂交检测相互作用 | 第37-40页 |
| 1.1 基因的克隆 | 第37-38页 |
| 1.1.1 Rv1688基因、Rv2436基因的克隆 | 第37页 |
| 1.1.2 Ms3759基因、Ms4585基因的克隆 | 第37-38页 |
| 1.2 共转化菌株的构建 | 第38页 |
| 1.3 检测相互作用 | 第38-40页 |
| 2 蛋白质表达 | 第40-42页 |
| 3 解螺旋反应实验检测相互作用 | 第42-45页 |
| 4 SPR检测相互作用 | 第45-48页 |
| 5 糖苷水解酶实验检测相互作用 | 第48-50页 |
| 6 纤维素薄层层析实验(TLC)检测相互作用 | 第50-52页 |
| 7 免疫共沉淀实验检测相互作用 | 第52-53页 |
| 8 RT-PCR检测不同时期表达量的变化 | 第53-54页 |
| 9 相互作用位点的定位 | 第54-63页 |
| 9.1 细菌双杂交实验 | 第54-55页 |
| 9.2 蛋白质表达 | 第55-57页 |
| 9.3 解螺旋反应实验 | 第57-59页 |
| 9.4 SPR实验 | 第59页 |
| 9.5 DNA糖苷水解酶实验 | 第59-61页 |
| 9.6 核糖激酶磷酸化实验 | 第61-63页 |
| 第四章 总结和讨论 | 第63-66页 |
| 1 总结 | 第63页 |
| 2 讨论 | 第63-65页 |
| 2.1 DNA拓扑异构酶与3-甲基腺嘌呤DNA糖苷水解酶相互作用 | 第63-64页 |
| 2.2 DNA拓扑异构酶与核糖激酶相互作用 | 第64-65页 |
| 3 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
