| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 纤维素的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 纤维素的性质 | 第12-13页 |
| 1.1.2 纤维素的降解 | 第13-15页 |
| 1.2 纤维素酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.1 纤维素酶来源 | 第15页 |
| 1.2.2 纤维素酶的分离纯化 | 第15-16页 |
| 1.2.3 纤维素酶的理化性质 | 第16页 |
| 1.3 微生物育种进展 | 第16-18页 |
| 1.4 诱变机理 | 第18-22页 |
| 1.5 剂量的选择 | 第22-23页 |
| 1.6 纤维素降解菌的选育研究进展 | 第23-26页 |
| 1.7 本研究的目的意义和研究内容 | 第26-28页 |
| 2 纤维素降解嗜热菌的筛选 | 第28-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 培养基 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2.1.2.1 三硝基水杨酸试剂（DNS） | 第28-29页 |
| 2.1.2.2 Tris-HCl 缓冲溶液（pH7.0） | 第29页 |
| 2.1.2.3 1mg/ml 标准葡萄糖溶液 | 第29页 |
| 2.1.2.4 测酶活溶液 | 第29页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 样品采集及处理 | 第29页 |
| 2.2.2 纤维素降解菌的分离纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.3 纤维素降解嗜热菌的筛选 | 第30页 |
| 2.2.4 菌株的复筛 | 第30-31页 |
| 2.2.4.1 葡萄糖标准曲线的制定 | 第30页 |
| 2.2.4.2 粗酶液的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.4.3 酶活测定 | 第31页 |
| 2.3 结果分析与讨论 | 第31-35页 |
| 2.3.1 纤维素降解嗜热菌初筛结果 | 第31-33页 |
| 2.3.2 纤维素降解嗜热菌的复筛 | 第33-35页 |
| 2.3.2.1 葡萄糖标准曲线的制作 | 第33页 |
| 2.3.2.2 酶活复筛结果 | 第33-35页 |
| 3 菌株YT-40-1 和WJM-4-G 的鉴定及生物信息学分析 | 第35-48页 |
| 3.1 实验材料及仪器 | 第35-37页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1.1 实验菌株及载体 | 第35页 |
| 3.1.1.2 培养基 | 第35-36页 |
| 3.1.1.3 实验试剂 | 第36页 |
| 3.1.1.4 常用溶液配制 | 第36页 |
| 3.1.1.5 引物 | 第36页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.2 菌株YT-40-1 和WJM-4-G 的形态学鉴定 | 第37页 |
| 3.2.1 菌株YT-40-1 和WJM-4-G 的形态学观察 | 第37页 |
| 3.2.2 光学显微镜盖片观察菌体及孢子形态 | 第37页 |
| 3.3 菌株YT-40-1 和WJM-4-G 的分子鉴定 | 第37-41页 |
| 3.3.1 菌株的培养 | 第37页 |
| 3.3.2 DNA 提取 | 第37-38页 |
| 3.3.3 ITS rDNA 基因的PCR 扩增 | 第38页 |
| 3.3.4 PCR 结果检测 | 第38页 |
| 3.3.5 PCR 产物回收 | 第38-39页 |
| 3.3.6 连接反应 | 第39页 |
| 3.3.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| 3.3.8 连接产物的转化 | 第40页 |
| 3.3.9 质粒小量提取 | 第40页 |
| 3.3.10 菌液PCR 验证 | 第40-41页 |
| 3.3.11 双酶切验证 | 第41页 |
| 3.3.12 核酸序列测定与序列比对分析 | 第41页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第41-48页 |
| 3.4.1 菌株YT-40-1 和WJM-4-G 的形态学鉴定 | 第41-45页 |
| 3.4.2 菌株的分子鉴定 | 第45-48页 |
| 4. TY-40-1 和WJM-4-G 的产酶条件优化 | 第48-55页 |
| 4.1 材料 | 第48页 |
| 4.1.1 菌株 | 第48页 |
| 4.1.2 培养基 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 菌种的制备 | 第48页 |
| 4.2.2 菌体生长曲线测定 | 第48页 |
| 4.2.3 产酶条件测定 | 第48-49页 |
| 4.2.3.1 发酵时间对菌株产酶的影响 | 第48页 |
| 4.2.3.2 培养温度对菌株产酶的影响 | 第48-49页 |
| 4.2.3.3 培养基初始pH 值对菌株产酶的影响 | 第49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-54页 |
| 4.3.1 菌体生长曲线 | 第49-50页 |
| 4.3.2 产酶条件研究 | 第50-54页 |
| 4.3.2.1 培养时间对产酶的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.2.2 培养温度对菌株产酶的影响 | 第51-53页 |
| 4.3.2.3 培养基初始pH 值对菌株产酶的影响 | 第53-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 5 .诱变育种 | 第55-68页 |
| 5.1 材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 菌株 | 第55页 |
| 5.1.2 培养基 | 第55页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第55页 |
| 5.1.4 实验试剂 | 第55-56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-58页 |
| 5.2.1 孢子悬浮液制备 | 第56页 |
| 5.2.2 出发菌株紫外线诱变 | 第56页 |
| 5.2.3 亚硝基胍（NTG）诱变 | 第56页 |
| 5.2.4 紫外线和亚硝基胍复合处理 | 第56-57页 |
| 5.2.5 硫酸二乙酯（DES）诱变处理 | 第57页 |
| 5.2.6 紫外线和硫酸二乙酯复合处理 | 第57页 |
| 5.2.7 氯化锂处理 | 第57页 |
| 5.2.8 等离子体诱变 | 第57-58页 |
| 5.2.9 纤维素酶高产突变株的筛选 | 第58页 |
| 5.3 结果与分析 | 第58-68页 |
| 5.3.1 紫外诱变结果 | 第58-60页 |
| 5.3.2 亚硝基胍诱变结果 | 第60-61页 |
| 5.3.3 硫酸二乙酯诱变结果 | 第61-63页 |
| 5.3.4 氯化锂诱变结果 | 第63-65页 |
| 5.3.5 等离子体诱变结果 | 第65-67页 |
| 5.3.6 复合诱变纤维素酶高产突变株的筛选 | 第67页 |
| 5.3.7 小结 | 第67-68页 |
| 6. 纤维素酶高产突变株酶活提高的机理研究 | 第68-74页 |
| 6.1 材料与方法 | 第68页 |
| 6.1.1 菌株 | 第68页 |
| 6.1.2 培养基 | 第68页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第68页 |
| 6.1.4 试剂 | 第68页 |
| 6.2 实验方法 | 第68-71页 |
| 6.2.1 纤维素酶高产突变株与出发菌株SDS-PAGE 分析 | 第68-70页 |
| 6.2.1.1 菌体总蛋白质的提取（TCA/丙酮法） | 第68-69页 |
| 6.2.1.2 蛋白质样品的裂解 | 第69页 |
| 6.2.1.3 蛋白质定量测定 | 第69页 |
| 6.2.1.4 全菌蛋白SDS-PAGE | 第69-70页 |
| 6.2.2 纤维素酶高产突变株与出发菌株RAPD 分析 | 第70-71页 |
| 6.3 结果与分析 | 第71-74页 |
| 6.3.1 蛋白质标准曲线 | 第71页 |
| 6.3.2 纤维素酶高产突变株与出发菌株差异蛋白质分析 | 第71-72页 |
| 6.3.3 纤维素酶高产突变株与出发菌株DNA 指纹比较分析 | 第72-74页 |
| 7 全文总结与展望 | 第74-76页 |
| 7.1 全文总结 | 第74-75页 |
| 7.2 本文存在的问题及深入的方向 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-81页 |
| 附录 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
