| 本论文的创新点 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-51页 |
| 第一章 肿瘤与肿瘤微环境 | 第13-27页 |
| 前言 | 第13-14页 |
| 1.1 肿瘤与癌症 | 第14-17页 |
| 1.1.1 肿瘤的定义 | 第14页 |
| 1.1.2 良性肿瘤与恶性肿瘤 | 第14页 |
| 1.1.3 癌症的命名和分类 | 第14-15页 |
| 1.1.4 肿瘤的临床分级和分期 | 第15-17页 |
| 1.1.5 肿瘤的发生 | 第17页 |
| 1.2 肿瘤微环境 | 第17-27页 |
| 1.2.1 肿瘤相关成纤维细胞对肿瘤行为的影响 | 第18-20页 |
| 1.2.2 细胞外基质(extracellular matrix,ECM) | 第20-22页 |
| 1.2.3 缺氧环境与血管再生 | 第22-23页 |
| 1.2.4 炎症微环境与肿瘤 | 第23-24页 |
| 1.2.5 肿瘤微环境的临床应用 | 第24-27页 |
| 第二章 Fibulin蛋白家族及其功能 | 第27-39页 |
| 前言 | 第27页 |
| 2.1 细胞外基质(ECM)与Fibul in蛋白家族 | 第27-28页 |
| 2.2 Fibulin蛋白结构域 | 第28-30页 |
| 2.3 Fibulins与细胞外基质组份的相互作用 | 第30-33页 |
| 2.4 Fibul in蛋白的表达 | 第33-35页 |
| 2.5 在人类疾病中Fibulin家族的突变 | 第35-36页 |
| 2.6 Fibulin动物模型 | 第36-37页 |
| 2.7 Fibulins与细胞的迁移和迁徙能力 | 第37-38页 |
| 2.8 结论 | 第38-39页 |
| 第三章 RasGRP与Ras的激活 | 第39-51页 |
| 前言 | 第39页 |
| 3.1 Ras信号通路概述 | 第39-40页 |
| 3.2 RasGRP1的发现 | 第40-41页 |
| 3.3 RasGRP2的特性 | 第41-43页 |
| 3.4 RasGRP3的特性 | 第43-45页 |
| 3.5 RasGRP4的特性 | 第45-46页 |
| 3.6 RasGRP的定位 | 第46-47页 |
| 3.7 RasGRP与其它Ras调控机制的联系 | 第47-49页 |
| 3.8 RasGRP与肿瘤 | 第49页 |
| 3.9 RasGRP作为药物靶点的研究 | 第49-51页 |
| 第二部分 研究结果 | 第51-96页 |
| 第四章 Fibulin-5在膀胱癌组织和细胞系中低表达 | 第51-61页 |
| 摘要 | 第51页 |
| 4.1 前言 | 第51-52页 |
| 4.2 材料和方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 组织样本、细胞和试剂 | 第52页 |
| 4.2.2 免疫组织化学IHC | 第52-53页 |
| 4.2.3 Western blot分析 | 第53页 |
| 4.2.4 组织和细胞总RNA的提取 | 第53-54页 |
| 4.2.5 逆转录PCR | 第54页 |
| 4.2.6 实时定量PCR(Real-Time PCR) | 第54-55页 |
| 4.3 结果 | 第55-59页 |
| 4.3.1 Fibulin5在正常膀胱上皮组织中高表达,而在肿瘤组织中低表达 | 第55页 |
| 4.3.2 组织芯片结果 | 第55-57页 |
| 4.3.3 Fibulin-5的表达与肿瘤的分级和分期具有相关性 | 第57-58页 |
| 4.3.4 Fibulin-5在膀胱癌细胞系中的表达 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 启动子区高度甲基化导致Fibulin-5基因在膀胱癌中低表达 | 第61-71页 |
| 摘要 | 第61页 |
| 5.1 前言 | 第61-62页 |
| 5.2 材料与方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 组织样本、细胞与试剂 | 第62页 |
| 5.2.2 基因组DNA的提取和处理 | 第62-63页 |
| 5.2.3 甲基化特异性PCR(MSP) | 第63页 |
| 5.2.4 亚硫酸氢盐测序法BSP | 第63页 |
| 5.2.5 5-AZA去甲基化检测 | 第63-64页 |
| 5.3 结果 | 第64-69页 |
| 5.3.1 Fibulin-5基因启动子区CpG岛分析 | 第64-65页 |
| 5.3.2 膀胱癌组织中Fibulin-5基因启动子区甲基化的检测 | 第65-66页 |
| 5.3.3 膀胱癌细胞系中Fibulin-5基因启动子区甲基化的检测 | 第66页 |
| 5.3.4 膀胱癌细胞系中Fibulin-5基因启动子区的甲基化测序 | 第66-68页 |
| 5.3.5 5-AZA去甲基化处理后Fibulin-5表达增高 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 Fibulin-5介导的膀胱癌转移机制的研究 | 第71-78页 |
| 摘要 | 第71页 |
| 6.1 前言 | 第71-72页 |
| 6.2 材料和方法 | 第72-73页 |
| 6.2.1 质粒、细胞和试剂 | 第72页 |
| 6.2.2 质粒DNA转染 | 第72页 |
| 6.2.3 Transwell法检测细胞迁移和侵袭 | 第72-73页 |
| 6.3 结果 | 第73-76页 |
| 6.3.1 Fibulin5抑制膀胱癌细胞5637的迁移和侵袭 | 第73-74页 |
| 6.3.2 过表达Fibulin5抑制MMP7和MMP9的表达 | 第74-75页 |
| 6.3.3 过表达MMP7和MMP9增强5637细胞的迁移和侵袭能力 | 第75-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第七章 RasGRP2介导溶瘤病毒mtHSV的侵染 | 第78-96页 |
| 摘要 | 第78页 |
| 7.1 前言 | 第78-79页 |
| 7.2 材料和方法 | 第79-84页 |
| 7.2.1 病毒、菌株、细胞和试剂 | 第79-80页 |
| 7.2.2 文库 | 第80页 |
| 7.2.3. 病毒的大量制备与纯化 | 第80-81页 |
| 7.2.4. 病毒空斑测定 | 第81页 |
| 7.2.5. 噬菌体十五肽文库筛选 | 第81-82页 |
| 7.2.6 病毒铺覆蛋白印迹技术(Virus overlay protein binding assay,VOPBA) | 第82页 |
| 7.2.7 免疫共沉淀 | 第82-83页 |
| 7.2.8 MTT分析 | 第83-84页 |
| 7.2.9 β-半乳糖苷酶检测 | 第84页 |
| 7.3 研究结果 | 第84-93页 |
| 7.3.1 病毒的增殖、分离和提纯 | 第84-85页 |
| 7.3.2 mtHSV相互作用蛋白的筛选 | 第85-86页 |
| 7.3.3 Rasgrp2蛋白和mtHSV在体内的相互作用 | 第86-87页 |
| 7.3.4 Rasgrp2蛋白和mtHSV在体外的直接结合 | 第87页 |
| 7.3.5 NIH3T3细胞为mtHSV的非允许细胞 | 第87-88页 |
| 7.3.6 Rasgrp2蛋白在NIH3T3细胞内无本底表达 | 第88页 |
| 7.3.7 Rasgrp2的表达改变了NIH3T3细胞对mtHSV的允许性 | 第88-90页 |
| 7.3.8 Rasgrp2抗体抑制了mtHSV对NIH3T3细胞的感染 | 第90-91页 |
| 7.3.9 mtHSV侵染Hela细胞后,Ras在细胞内表达量的变化 | 第91-92页 |
| 7.3.10 mtHSV侵染Hela细胞后,Rasgrp2在细胞内含量的变化 | 第92页 |
| 7.3.11 过表达Rasgrp2能够显著促进膜上Ras的表达 | 第92-93页 |
| 7.4 讨论 | 第93-96页 |
| 研究总结 | 第96-97页 |
| 博士期间发表和待发表的论文 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
