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不同途径免疫NDV弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫反应的研究

中文摘要第1-18页
英文摘要第18-23页
文献综述第23-54页
 第一部分 家禽黏膜免疫系统及免疫功能的研究进展第23-44页
  1 家禽黏膜免疫系统第23-44页
   ·家禽黏膜免疫系统的结构第23-31页
     ·黏膜相关淋巴样组织(MALT)第24-28页
     ·效应部位第28-30页
     ·致敏淋巴细胞散布途径第30-31页
   ·家禽黏膜免疫的功能第31-32页
     ·非特异性免疫功能第31页
     ·特异性免疫功能第31-32页
     ·免疫耐受第32页
   ·家禽黏膜免疫反应的特点第32页
   ·家禽黏膜免疫反应的机制第32-34页
     ·SIgA 的结构及特性第32-33页
     ·SIgA 的产生及其转运第33-34页
   ·家禽黏膜免疫反应在抗感染中的作用第34-35页
   ·家禽黏膜免疫的免疫途径第35-36页
     ·呼吸道黏膜免疫第35页
     ·消化道黏膜免疫第35-36页
     ·眼结膜黏膜免疫第36页
   ·家禽黏膜免疫的调节第36-37页
     ·T 细胞的调节作用第36-37页
     ·上皮细胞的调节作用第37页
     ·粘膜免疫系统的记忆功能第37页
     ·神经内分泌因素的调节作用第37页
   ·家禽黏膜免疫的免疫佐剂第37-41页
     ·霍乱毒素和大肠杆菌不耐热毒素第38页
     ·细菌脂多糖第38-39页
     ·益生菌第39页
     ·核酸佐剂第39-40页
     ·细胞因子佐剂第40-41页
     ·壳聚糖第41页
   ·疫苗与黏膜免疫的关系第41-42页
   ·家禽黏膜免疫的研究动向第42-44页
     ·家禽黏膜免疫机理的研究第42-43页
     ·分泌性 IgA 生物活性的研究第43页
     ·提高局部黏膜免疫应答能力的研究第43页
     ·新的疫苗释放系统的研究第43-44页
 第二部分 家禽对新城疫病毒免疫反应的研究进展第44-54页
  1 家禽对 NDV 的体液免疫第44-48页
   ·体液免疫的作用机制第44-46页
   ·影响体液免疫的因素第46-48页
     ·疫苗种类对体液免疫的影响第46页
     ·免疫程序对体液免疫的影响第46-47页
     ·免疫抑制病原对体液免疫的影响第47-48页
  2 家禽对 NDV 的细胞免疫第48-49页
  3 家禽对 NDV 的黏膜免疫第49-52页
   ·哈德氏腺(HG)在对 NDV 黏膜免疫反应中的作用第49-50页
   ·CALT 在对 NDV 黏膜免疫反应中的作用第50页
   ·BALT 在对 NDV 黏膜免疫反应中的作用第50-51页
   ·GALT 在对 NDV 黏膜免疫反应中的作用第51页
   ·ND疫苗类型对黏膜免疫的影响第51-52页
  4 ND 疫苗免疫失败的原因第52-53页
   ·首免时间不合适第52页
   ·免疫方法不当第52-53页
   ·免疫间隔时间不合理第53页
   ·免疫抑制因素的影响第53页
  5 本研究的目的与意义第53-54页
研究报告第54-128页
 第一部分 鸡 SIgA 的纯化及其抗病毒活性的初步研究第54-66页
  1 材料与方法第55-59页
   ·试验动物及鸡胚第55页
   ·病毒第55页
   ·胆汁及主要试剂第55页
   ·主要仪器第55页
   ·主要试剂的配制第55-56页
   ·1%鸡红细胞悬液第56页
   ·SIgA 的粗提纯第56-57页
     ·(NH_4)_2SO_4盐析法第56页
     ·PEG 沉淀法第56-57页
   ·SIgA 的纯化第57页
   ·蛋白含量测定第57页
   ·SIgA 纯度的鉴定第57页
   ·琼脂扩散试验第57页
   ·鸡 SIgA 体外抗 NDV 试验第57-58页
     ·NDV 处理及分组第57-58页
     ·鸡胚接种第58页
     ·鸡胚尿囊液 NDV 血凝效价的测定第58页
   ·鸡胚病毒中和试验第58-59页
   ·鸡SIgA体内抗NDV试验第59页
  2 结果与分析第59-64页
   ·鸡胆汁中 SIgA 过柱纯化第59-60页
   ·SIgA 粗提物和纯化的 SIgA 的蛋白含量第60页
   ·SIgA 粗提物和纯化的SIgA 的SDS-PAGE 电泳第60-61页
   ·纯化的鸡 SIgA 琼脂扩散试验的鉴定结果第61-62页
   ·鸡 SIgA 体外抗 NDV 试验结果第62-63页
   ·鸡胚尿囊液中 NDV 血凝效价测定结果第63页
   ·鸡胚病毒中和试验结果第63页
   ·鸡SIgA 体内抗NDV 试验结果第63-64页
  3 讨论第64-66页
   ·关于纯化鸡 SIgA 的意义第64页
   ·关于鸡 SIgA 纯化方法的建立第64-65页
   ·关于 SIgA 的抗病毒活性第65-66页
 第二部分 不同途径免疫 NDV 弱毒苗诱导鸡体黏膜和系统免疫发生规律的研究第66-84页
  1 材料与方法第66-71页
   ·试验动物第66页
   ·疫苗及病毒第66-67页
   ·NDV阳性及阴性血清第67页
   ·主要试剂及其配制方法第67-68页
   ·主要仪器第68页
   ·ELISA包被抗原的制备第68页
   ·1%鸡红细胞悬液的制备第68页
   ·检测抗 NDV 特异性 SIgA、IgG 和 IgM 的间接 ELISA 方法的建立第68-69页
     ·酶标抗体最佳工作浓度的确定第68页
     ·抗原最适包被浓度和样品最佳稀释度的确定第68-69页
     ·间接ELISA程序第69页
     ·特异性试验第69页
   ·血凝和血凝抑制试验试验第69-70页
   ·试验设计第70页
   ·被检样品采集方法第70页
   ·数据统计与分析第70-71页
  2 结果与分析第71-80页
   ·间接 ELISA 方法最佳反应条件的确定第71-72页
     ·酶标抗体工作浓度的确定第71页
     ·抗原包被和样品最佳稀释度的确定第71-72页
     ·特异性试验结果第72页
   ·不同途径免疫 NDV 弱毒苗引起的系统体液免疫反应第72-74页
     ·血清 HI 抗体滴度第72-73页
     ·血清NDV 特异性IgM、IgG 和 IgA 抗体水平第73-74页
   ·呼吸道黏膜相关抗体介导的黏膜免疫反应第74-75页
     ·气管洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第74页
     ·肺洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第74-75页
   ·消化道黏膜相关抗体介导的黏膜免疫反应第75-80页
     ·十二指肠洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第75-76页
     ·空肠洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第76-77页
     ·回肠洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第77-78页
     ·盲肠洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第78-79页
     ·直肠洗液中 NDV 特异性 IgM、IgG 和 SIgA 抗体水平第79页
     ·胆汁相关抗体介导的黏膜免疫反应第79-80页
  3 讨论第80-84页
   ·关于检测鸡 NDV 特异性 SIgA、IgG 和 IgM 的间接 ELISA 方法的建立第80-81页
   ·血清中 NDV 特异性抗体介导的系统免疫的发生规律第81页
   ·呼吸道中NDV特异性介导的黏膜免疫的发生规律第81-82页
   ·消化道中 NDV 特异性抗体介导的黏膜免疫的发生规律第82页
   ·胆汁中 NDV 特异性抗体的消长规律第82-83页
   ·不同免疫途径免疫 ND 弱毒苗诱导的局部黏膜免疫反应与共同黏膜免疫反应的关系第83-84页
 第三部分 不同途径免疫NDV弱毒苗诱导的黏膜和免疫器官中 IgA、IgM和 IgG阳性细胞变化规律的研究第84-105页
  1 材料与方法第84-87页
   ·疫苗、试验动物和主要试剂第84-85页
   ·主要仪器第85页
   ·主要溶液的配制第85页
   ·试验动物分组及处理第85-86页
   ·样品的采集及处理第86页
   ·组织包埋及切片第86页
     ·载、盖玻片的处理第86页
     ·石蜡切片的制备第86页
   ·检测 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞的间接免疫过氧化物酶法的优化与建立第86-87页
     ·间接免疫过氧化物酶法反应条件的优化第86页
     ·间接免疫过氧化物酶法的反应程序第86-87页
   ·组织学观察与数据处理统计分析第87页
     ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞判定标准第87页
     ·组织部位判定标准第87页
     ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞的计数第87页
   ·数据处理第87页
  2 结果与分析第87-101页
   ·检测 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞的间接免疫组化法的建立第87-90页
     ·抗原修复方法的选择第87-88页
     ·一抗最佳稀释度的确定第88-89页
     ·一抗最佳孵育条件的确定第89-90页
     ·免疫组化各因素经过组合优化后的反应程序第90页
   ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞在脾脏中的分布规律第90-91页
   ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞在气管黏膜中的分布规律第91-92页
   ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞在不同肠管黏膜中的分布规律第92-97页
     ·十二指肠黏膜中 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞分布规律第92-93页
     ·空肠黏膜中 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞分布规律第93-94页
     ·回肠黏膜中 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞分布规律第94-95页
     ·盲肠扁桃体黏膜 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞分布规律第95-96页
     ·直肠黏膜中 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞分布规律第96-97页
   ·不同肠管黏膜固有层IgA、IgM和IgG阳性细胞数量的增殖规律第97-101页
     ·脾脏中 IgAI、gM 和 IgG 阳性细胞数量的增殖规律第97-98页
     ·十二指肠黏膜固有层 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞数量的增殖规律第98-99页
     ·空肠黏膜固有层 IgAI、gM 和 IgG 阳性细胞数量的增殖规律第99页
     ·回肠黏膜固有层 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞数量的增殖规律第99-100页
     ·直肠黏膜固有层 IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞数量的增殖规律第100-101页
  3 讨论第101-105页
   ·免疫组织化学试验中相关问题探讨第101页
   ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞在脾脏中的发生增值规律及其免疫学意义第101-102页
   ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞在呼吸道中的发生增值规律及其免疫学意义第102-103页
   ·IgA、IgM 和 IgG 阳性细胞在消化道中的发生增值规律及其免疫学意义第103-105页
 第四部分 免疫抑制对 NDV 弱毒苗诱导的鸡体黏膜免疫反应的影响第105-119页
  1 材料与方法第105-107页
   ·SPF 鸡胚第105页
   ·主要试剂及仪器第105-106页
   ·NDV 疫苗及强毒第106页
   ·试验设计第106页
   ·样品的采集及处理第106页
   ·鸡外周血淋巴细胞数量的测定第106页
   ·血清 HI 抗体滴度的测定第106-107页
   ·间接 ELISA 反应程序第107页
   ·免疫组化反应程序第107页
   ·攻毒试验第107页
   ·数据处理与分析第107页
  2 结果与分析第107-115页
   ·免疫抑制对法氏囊、胸腺和脾脏相对重量的影响第107-108页
   ·免疫抑制对外周血淋巴细胞总数的影响第108-109页
   ·免疫抑制对血清 HI 抗体滴度的影响第109-110页
   ·免疫抑制对气管洗液中 NDV 特异性 SIgA 抗体水平的影响第110页
   ·免疫抑制对十二指肠洗液 NDV 特异性 SIgA 抗体水平的影响第110-111页
   ·免疫抑制对胆汁 NDV 特异性 SIgA 抗体水平的影响第111-112页
   ·免疫抑制对十二指肠黏膜 IgA 阳性细胞的分布和数量的影响第112页
   ·免疫抑制对空肠黏膜IgA阳性细胞的分布和数量的影响第112-113页
   ·免疫抑制对空肠黏膜 IgA 阳性细胞的分布和数量的影响第113-114页
   ·攻毒后试验结果第114-115页
  3 讨论第115-119页
   ·关于 SPF 鸡体液免疫抑制模型的建立第115-116页
   ·SPF 鸡体液免疫抑制对局部黏膜免疫的影响第116-117页
   ·SPF 鸡体液免疫抑制模型的建立的意义第117-119页
 第五部分 免疫增强剂对 NDV 弱毒苗诱导的鸡体黏膜免疫反应的影响第119-128页
  1 材料与方法第119-121页
   ·试验动物第119页
   ·疫苗和毒株第119页
   ·免疫增强剂第119-120页
     ·CpG ODN第119-120页
     ·黄芪多糖第120页
     ·左旋咪唑第120页
   ·各种免疫增强剂与 NDV 弱毒苗的准备第120页
   ·试验设计第120-121页
   ·血清 HI 抗体滴度的测定第121页
   ·NDV 特异性 SIgA 抗体水平的检测第121页
   ·数据处理与统计分析第121页
  2 结果与分析第121-125页
   ·不同免疫增强剂对血清 HI 抗体滴度的影响第121-122页
   ·不同免疫增强剂对气管洗液 NDV 特异性 SIgA 水平的影响第122-123页
   ·不同免疫增强剂对十二指肠洗液 NDV 特异性 SIgA 水平的影响第123-124页
   ·不同免疫增强剂对胆汁 NDV 特异性 SIgA 水平的影响第124-125页
  3 讨论第125-128页
结论第128-129页
创新点第129-130页
参考文献第130-147页
致谢第147-148页
博士期间待发表或已发表论文第148-149页
博士学位论文内容简介及自评第149页

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