柑橘原生质体瞬时转化体系的建立及应用
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1. 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 课题的提出 | 第11-12页 |
| 1.2 前人研究进展 | 第12-22页 |
| 1.2.1 植物原生质体 | 第12-14页 |
| 1.2.1.1 植物原生质体简介 | 第12页 |
| 1.2.1.2 植物材料的选取 | 第12-13页 |
| 1.2.1.3 植物原生质体的分离 | 第13页 |
| 1.2.1.4 渗透压稳定剂 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物原生质体转化方法 | 第14-18页 |
| 1.2.2.1 PEG-Ca介导转化法 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 电击转化法 | 第15-16页 |
| 1.2.2.3 脂质体介导转化法 | 第16页 |
| 1.2.2.4 农杆菌共转化法 | 第16-17页 |
| 1.2.2.5 显微注射法 | 第17页 |
| 1.2.2.6 激光微束穿刺法 | 第17-18页 |
| 1.2.3 绿色荧光蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.4 原生质体瞬时转化体系的应用 | 第19-22页 |
| 1.2.4.1 亚细胞定位的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.4.2 信号传导调控的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.4.3 蛋白质互作的应用 | 第21页 |
| 1.2.4.4 CRISPR/Cas体系的应用 | 第21-22页 |
| 1.3 本实验研究目的及内容 | 第22-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 酶及其他试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 常用实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.5 培养基及其配方 | 第25页 |
| 2.1.6 原生质体提纯及培养试剂配方 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 载体构建方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1.1 引物的设计 | 第26页 |
| 2.2.1.2 载体的线性化 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 目的基因PCR扩增 | 第27页 |
| 2.2.1.4 线性化载体及目的基因片段凝胶回收 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 线性载体与目的基因片段的连接 | 第28页 |
| 2.2.2 质粒转化方法 | 第28-29页 |
| 2.2.3 质粒抽提方法 | 第29-30页 |
| 2.2.4 原生质体分离原材料制备 | 第30页 |
| 2.2.5 原生质体提纯方法 | 第30-31页 |
| 2.2.6 原生质体密度统计及活力检测方法 | 第31-32页 |
| 2.2.7 原生质体PEG-Ca介导转化法 | 第32页 |
| 2.2.8 转化后原生质体的共培养 | 第32-33页 |
| 2.2.9 原生质体瞬时转化效率的统计 | 第33-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-45页 |
| 3.1 双分子荧光互补载体的构建 | 第34页 |
| 3.2 原生质体提纯及活力测定 | 第34-36页 |
| 3.3 原生质体瞬时转化条件的影响 | 第36-41页 |
| 3.3.1 PEG的种类 | 第36-37页 |
| 3.3.2 PEG4000的浓度 | 第37-38页 |
| 3.3.3 PEG-Ca溶液中甘露醇浓度 | 第38页 |
| 3.3.4 金属浴热激时间 | 第38-39页 |
| 3.3.5 转化质粒的浓度 | 第39-40页 |
| 3.3.6 转化原生质体共培养时间 | 第40页 |
| 3.3.7 叶片材料 | 第40-41页 |
| 3.4 柑橘原生质体瞬时转化体系 | 第41-43页 |
| 3.5 亚细胞定位 | 第43-44页 |
| 3.6 双分子荧光互补 | 第44-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 影响转化效率的因素 | 第45-47页 |
| 4.1.1 原生质体的分离材料 | 第45页 |
| 4.1.2 原生质体转化的条件 | 第45-46页 |
| 4.1.3 转化后原生质体的共培养 | 第46-47页 |
| 4.2 瞬时转化体系的应用 | 第47页 |
| 4.3 课题创新与工作展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-59页 |
| 附录 | 第59-61页 |
| 附录Ⅰ 附图 | 第59-60页 |
| 附录Ⅱ 攻读硕士学位期间发表论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
