| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要符号表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 乳腺癌的研究现状 | 第11-14页 |
| 1.1.1 乳腺癌简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 乳腺癌的危害、治疗及转移 | 第12-13页 |
| 1.1.3 肿瘤转移方式、机制 | 第13页 |
| 1.1.4 乳腺癌细胞粘附与直接共孵模型设想 | 第13-14页 |
| 1.2 美她司酮的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.1 美她司酮的简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 美她司酮及母体药物用于癌症的研究 | 第15-16页 |
| 1.3 Cyr61研究进展及其与乳腺癌的关系 | 第16-19页 |
| 1.3.1 蛋白质组学技术简介与Cyr61 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Cyr61研究进展及其与乳腺癌的关系 | 第17-19页 |
| 1.4 本论文的主要研究内容及创新点 | 第19-21页 |
| 1.4.1 论文的主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.2 论文的创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 美她司酮体外干预共孵作用研究 | 第21-34页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第21-24页 |
| 2.1.1 主要的实验用品与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要的仪器设备与耗材 | 第22页 |
| 2.1.3 常用溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第24页 |
| 2.2.2 细胞的增殖抑制作用 | 第24页 |
| 2.2.3 iTRAQ检测和质谱分析 | 第24-25页 |
| 2.2.4 ELISA验证Cyr61与美她司酮的剂量相关性 | 第25-26页 |
| 2.2.5 ELISA探究共孵体系对Cyr61表达的影响 | 第26页 |
| 2.2.6 激光共聚焦延时拍摄 | 第26-27页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-32页 |
| 2.3.1 美她司酮对乳腺癌和内皮细胞的增殖影响 | 第27-28页 |
| 2.3.2 药物-共孵蛋白质组学结果分析 | 第28-29页 |
| 2.3.3 共孵分泌蛋白Cyr61与美她司酮的剂效关系 | 第29-30页 |
| 2.3.4 各组Cyr61分泌关系分析 | 第30-31页 |
| 2.3.5 共孵细胞形态、行为学成像 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 2.4.1 美她司酮对乳腺癌细胞及内皮细胞增殖的影响 | 第32-33页 |
| 2.4.2 美她司酮干预共孵体系的目标蛋白选择 | 第33页 |
| 2.5 小结 | 第33-34页 |
| 第三章 美她司酮体外抑制乳腺癌粘附、迁移及机制的研究 | 第34-61页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第34-37页 |
| 3.1.1 主要的实验药品与试剂 | 第34-36页 |
| 3.1.2 主要的仪器设备与耗材 | 第36页 |
| 3.1.3 常用溶液的配制 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-47页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第38页 |
| 3.2.2 Cyr61干扰siRNA序列的建立 | 第38-39页 |
| 3.2.3 pcDNA3.1-Cyr61重组质粒的构建 | 第39-43页 |
| 3.2.4 转染重组质粒和siRNA | 第43页 |
| 3.2.5 RT-PCR实验检验转染情况 | 第43-44页 |
| 3.2.6 Western Blot实验检验转染情况 | 第44-45页 |
| 3.2.7 各组肿瘤细胞与激活的HPMEC细胞的粘附实验 | 第45页 |
| 3.2.8 划痕实验检测细胞迁移 | 第45页 |
| 3.2.9 CO-IP结合WB探究Cyr61与整合素αvβ1的互作关系 | 第45-46页 |
| 3.2.10 免疫荧光实验定位Cyr61和整合素αvβ1 | 第46页 |
| 3.2.11 Western Blot检测用药组蛋白量变化 | 第46页 |
| 3.2.12 ELISA检测用药组胞外Cyr61含量变化 | 第46页 |
| 3.2.13 RT-PCR检测用药组目标基因的表达情况 | 第46-47页 |
| 3.2.14 统计学分析 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-58页 |
| 3.3.1 人乳腺癌细胞MDA-MB-231总RNA完整性电泳结果 | 第47页 |
| 3.3.2 Cyr61蛋白编码区全长的扩增 | 第47-48页 |
| 3.3.3 Cyr61扩增后回收纯化 | 第48页 |
| 3.3.4 T-Cyr61阳性克隆菌落验证 | 第48-49页 |
| 3.3.5 pcDNA3.1和T-Cyr61质粒双酶切并连接构建重组质粒 | 第49页 |
| 3.3.6 重组质粒pcDNA3.1-Cyr61鉴定和制备产物鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.7 转染重组质粒和siRNA效果鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.8 Cyr61和美她司酮对MDA-MB-231粘附能力的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.9 Cyr61和美她司酮对MDA-MB-231迁移能力的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.10 美她司酮干预MDA-MB-231粘附迁移作用机制探讨 | 第54-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-60页 |
| 3.4.1 Cyr61和美她司酮影响乳腺癌的粘附和迁移 | 第58-59页 |
| 3.4.2 美她司酮通过Cyr61/整合素αvβ1抑制乳腺癌的粘附和迁移 | 第59-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 美她司酮体内干预乳腺癌细胞转移作用的研究 | 第61-69页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第61-62页 |
| 4.1.1 主要的实验药品与试剂 | 第61-62页 |
| 4.1.2 主要的仪器设备与耗材 | 第62页 |
| 4.1.3 常用溶液的配制 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第62页 |
| 4.2.2 动物 | 第62-63页 |
| 4.2.3 人乳腺癌裸鼠实验性肺转移模型制备 | 第63页 |
| 4.2.4 解剖及结节数抑制率计算 | 第63页 |
| 4.2.5 组织切片及HE染色实验 | 第63页 |
| 4.2.6 免疫组化 | 第63-64页 |
| 4.2.7 统计学分析 | 第64页 |
| 4.3 实验结果 | 第64-67页 |
| 4.3.1 美她司酮干预乳腺癌细胞体内实验性肺转移的研究 | 第64-65页 |
| 4.3.2 美她司酮干预乳腺癌细胞体内实验性肺转移HE切片的研究 | 第65-66页 |
| 4.3.3 免疫组化法检测美她司酮对Cyr61和整合素αvβ1在肺组织中表达的影响 | 第66-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-68页 |
| 4.5 小结 | 第68-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录 | 第81-87页 |
| 个人简历 | 第87-88页 |
