| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.1 子宫内膜的结构与功能 | 第11-12页 |
| 1.1.2 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的分离培养与纯化 | 第12-13页 |
| 1.2 细胞永生化研究进展 | 第13页 |
| 1.3 病毒感染 | 第13-17页 |
| 1.3.1 SV40 | 第13-15页 |
| 1.3.2 HPV | 第15-16页 |
| 1.3.3 EB | 第16-17页 |
| 1.4 癌基因介导 | 第17-18页 |
| 1.4.1 P53 | 第17-18页 |
| 1.4.2 PRb | 第18页 |
| 1.5 外源hTERT基因的导入 | 第18-21页 |
| 1.5.1 端粒与细胞衰老和永生化 | 第18-19页 |
| 1.5.2 端粒、端粒酶与衰老和癌变的关联 | 第19-20页 |
| 1.5.3 衰老和生长停滞 | 第20-21页 |
| 1.6 IFNT和MX研究进展 | 第21-22页 |
| 1.7 端粒酶实现永生化的意义 | 第22页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 奶牛子宫内膜组织采集与处理 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂配制 | 第25-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 奶牛子宫内膜腔上皮细胞体外培养方法 | 第27-28页 |
| 2.2.2 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的传代 | 第28页 |
| 2.2.3 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的鉴定 | 第28页 |
| 2.2.4 奶牛子宫内膜腔上皮细胞的冻存与复苏 | 第28-29页 |
| 2.2.5 细胞计数 | 第29页 |
| 2.2.6 pCI-neo-hTERT质粒的扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.7 pCI-neo-hTERT质粒纯度与浓度检测 | 第30页 |
| 2.2.8 pCI-neo-hTERT质粒酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.9 G418最佳筛选浓度的确定 | 第31页 |
| 2.2.10 pCI-neo-hTERT质粒转染奶牛子宫内膜腔上皮细胞 | 第31-32页 |
| 2.2.11 阳性奶牛子宫内膜腔上皮细胞的筛选 | 第32页 |
| 2.2.12 hTERT-BEECs形态学的观察 | 第32页 |
| 2.2.13 免疫荧光检测外源性hTERT在hTERT-BEECs中的表达 | 第32-33页 |
| 2.2.14 hTERT-BEECs的角蛋白鉴定 | 第33页 |
| 2.3 hTERT-BEECs生物学功能的鉴定 | 第33-36页 |
| 2.3.1 RT-PCR检测MX和IRF基因的表达 | 第33-36页 |
| 3 实验结果与分析 | 第36-44页 |
| 3.1 EECs培养结果 | 第36-38页 |
| 3.1.1 EECs原代培养 | 第36页 |
| 3.1.2 EECs的传代培养 | 第36-37页 |
| 3.1.3 EECs的角蛋白鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2 pCI-neo-hTERT质粒 | 第38-39页 |
| 3.2.1 pCI-neo-hTERT质粒扩增与双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 pCI-neo-hTERT质粒浓度和纯度的检测 | 第39页 |
| 3.3 G418对EECs最佳筛选浓度的确定 | 第39页 |
| 3.4 转染pCI-neo-hTERT质粒后阳性细胞的筛选 | 第39-42页 |
| 3.4.1 永生化奶牛子宫内膜腔上皮细胞形态学观察 | 第39-40页 |
| 3.4.2 永生化奶牛子宫内膜腔上皮细胞的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.4.3 细胞免疫荧光法鉴定hTERT基因的表达 | 第41-42页 |
| 3.5 RT-PCR检测MX和IRF基因的表达 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-49页 |
| 4.1 原代EECs培养方法的选择 | 第44-45页 |
| 4.2 原代EECs纯化方法的选择 | 第45页 |
| 4.3 细胞衰老与端粒的关系 | 第45-46页 |
| 4.4 细胞永生化方法的选择 | 第46-48页 |
| 4.5 imEECs的鉴定 | 第48-49页 |
| 5 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
