| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第17-28页 |
| 1.1 昆虫神经肽概述 | 第17-19页 |
| 1.1.1 昆虫主要神经肽的种类及功能 | 第17-18页 |
| 1.1.2 昆虫神经肽的研究意义 | 第18-19页 |
| 1.2 昆虫神经肽促咽侧体素的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.2.1 昆虫促咽侧体素的分离与结构 | 第19页 |
| 1.2.2 昆虫神经肽促咽侧体素的基因以及其分布 | 第19页 |
| 1.2.3 昆虫神经肽促咽侧体素的生理功能 | 第19-20页 |
| 1.3 昆虫神经肽受体研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 GPCRs | 第20页 |
| 1.3.2 G蛋白偶联受体所介导的细胞信号通路 | 第20-22页 |
| 1.3.3 昆虫G蛋白偶联受体(GPCR)分类及分布 | 第22页 |
| 1.4 昆虫神经肽促咽侧体素受体(ATR)的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.4.1 促咽侧体素受体在昆虫体内的分布 | 第22-25页 |
| 1.4.2 促咽侧体素受体(ATR)介导的信号通路 | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的意义和内容 | 第26-28页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第26-27页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第27-28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-51页 |
| 2.1 昆虫实验材料 | 第28页 |
| 2.2 试验试剂 | 第28-29页 |
| 2.3 仪器设备 | 第29页 |
| 2.4 促咽侧体受体ATR全长基因的克隆 | 第29-38页 |
| 2.4.1 RNA抽提 | 第29-30页 |
| 2.4.2 RNA浓度和纯度检测 | 第30页 |
| 2.4.3 cDNA合成 | 第30-31页 |
| 2.4.4 RACE引物设计 | 第31页 |
| 2.4.5 合成5'RACE和3'RACE Ready cDNA模板 | 第31-32页 |
| 2.4.6 5'RACE和3'RACE扩增 | 第32-34页 |
| 2.4.7 PCR产物的回收 | 第34-35页 |
| 2.4.8 回收产物连接克隆载体 | 第35-36页 |
| 2.4.9 感受态细胞的制备 | 第36页 |
| 2.4.10 连接产物的转化 | 第36-37页 |
| 2.4.11 阳性克隆的鉴定 | 第37页 |
| 2.4.12 棉铃虫ATR序列测定 | 第37页 |
| 2.4.13 Har-ATR序列拼接及ORF扩增 | 第37-38页 |
| 2.5 棉铃虫促咽侧体受体ATR全长序列分析 | 第38页 |
| 2.6 构建棉铃虫促咽侧体受体ATR系统进化树 | 第38页 |
| 2.7 棉铃虫促咽侧体及其受体基因的定量表达 | 第38-41页 |
| 2.7.1 RNA抽提 | 第38页 |
| 2.7.2 RNA浓度的测定 | 第38页 |
| 2.7.3 反转录成cDNA第一条链 | 第38-40页 |
| 2.7.4 定量引物的设计 | 第40页 |
| 2.7.5 荧光定量PCR | 第40-41页 |
| 2.7.6 荧光定量PCR的数据处理 | 第41页 |
| 2.8 棉铃虫促咽侧体素受体ATR的鉴定 | 第41-50页 |
| 2.8.1 棉铃虫ATR-pcDNA5载体构建 | 第42-45页 |
| 2.8.2 棉铃虫AT的合成 | 第45页 |
| 2.8.3 细胞培养 | 第45-46页 |
| 2.8.4 细胞转染前处理 | 第46页 |
| 2.8.5 转染 | 第46页 |
| 2.8.6 细胞检测前处理 | 第46-50页 |
| 2.9 模拟肽的合成及结合活性测定 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-66页 |
| 3.1 RNA抽提 | 第51页 |
| 3.2 棉铃虫促咽侧体受体ATR基因的克隆及序列分析 | 第51-54页 |
| 3.2.1 棉铃虫促咽侧体受体ATR受体3'RACE和5'RACE扩增 | 第51-52页 |
| 3.2.2 Har-ATR基因的全长cDNA序列分析 | 第52-54页 |
| 3.3 基于ATR序列的系统进化树 | 第54-55页 |
| 3.4 棉铃虫ATR多序列比对 | 第55-57页 |
| 3.5 棉铃虫促咽侧体AT及其受体基因ATR的定量表达 | 第57-58页 |
| 3.5.1 棉铃虫促咽侧体AT及其受体基因ATR在不同组织表达情况 | 第57页 |
| 3.5.2 棉铃虫AT及其受体基因ATR不同发育时期的表达情况 | 第57-58页 |
| 3.6 棉铃虫促咽侧体素受体ATR的鉴定 | 第58-66页 |
| 3.6.1 扩增棉铃虫ATR-ORF | 第58-59页 |
| 3.6.2 棉铃虫ATR重组质粒的构建 | 第59页 |
| 3.6.3 棉铃虫促咽侧体素受体的配体鉴定及信号通路确定 | 第59-64页 |
| 3.6.4 棉铃虫促咽侧体素GPCR基因模拟肽设计及鉴定 | 第64-66页 |
| 4 结论与展望 | 第66-68页 |
| 4.1 结论 | 第66-67页 |
| 4.1.1 棉铃虫促咽侧体受体ATR基因全长的克隆 | 第66页 |
| 4.1.2 棉铃虫促咽侧体素及其受体基因的表达 | 第66页 |
| 4.1.3 棉铃虫促咽侧体素受体的配体鉴定及信号通路确定 | 第66页 |
| 4.1.4 棉铃虫促咽侧体素GPCR基因模拟肽设计及鉴定 | 第66-67页 |
| 4.2 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第74页 |
