| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 结核病的发现 | 第13页 |
| 1.2 结核病的国内外现状 | 第13-14页 |
| 1.3 结核病的病原学 | 第14页 |
| 1.4 结核分枝杆菌与宿主的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.5 结核病疫苗的研制 | 第15-17页 |
| 1.5.1 减毒活疫苗—卡介苗 | 第15-16页 |
| 1.5.2 重组BCG疫苗和减毒活性结核疫苗 | 第16页 |
| 1.5.3 亚单位疫苗和活载体疫苗 | 第16-17页 |
| 1.5.4 DNA疫苗 | 第17页 |
| 1.5.5 灭活疫苗 | 第17页 |
| 1.6 PE/PPE蛋白家族 | 第17-22页 |
| 1.6.1 pe/ppe家族的进化和变异 | 第18页 |
| 1.6.2 PE/PPE家族的调控 | 第18-21页 |
| 1.6.3 PE/PPE家族蛋白与宿主免疫应答反应的关系 | 第21-22页 |
| 2 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 3 实验材料 | 第23-27页 |
| 3.1 培养基及主要抗生素的配制 | 第23页 |
| 3.2 各种分子生物学酶、常用试剂盒及常用试剂 | 第23-24页 |
| 3.3 溶液及缓冲液 | 第24-25页 |
| 3.4 质粒 | 第25页 |
| 3.5 菌株 | 第25-26页 |
| 3.6 引物序列表 | 第26-27页 |
| 4 实验方法 | 第27-41页 |
| 4.1 卡介苗BCG缺失突变株的构建 | 第27-34页 |
| 4.1.1 卡介苗BCG同源载体的构建 | 第27-32页 |
| 4.1.2 分枝杆菌噬菌体的制备 | 第32-33页 |
| 4.1.3 分枝杆菌噬菌体感染BCG获得基因缺失株 | 第33页 |
| 4.1.4 缺失突变株的鉴定 | 第33-34页 |
| 4.2 缺失突变株BCGΔWag22菌落形态的变化 | 第34-35页 |
| 4.3 缺失突变株BCGΔWag22生长曲线的测定 | 第35页 |
| 4.3.1 原始菌液的处理 | 第35页 |
| 4.3.2 生长曲线的测定 | 第35页 |
| 4.4 吞噬存活实验 | 第35-36页 |
| 4.4.1 细胞与细菌培养 | 第35-36页 |
| 4.5 BCG?Wag22对RAW264.7细胞毒性实验 | 第36-37页 |
| 4.5.1 细胞与细菌培养 | 第36页 |
| 4.5.2 不同菌株与RAW264.7细胞互作 | 第36页 |
| 4.5.3 LDH Cytotoxicity Assay Kit工作液的准备 | 第36页 |
| 4.5.4 样品的测定 | 第36-37页 |
| 4.6 PE-PGRS家族蛋白Wag22对小鼠巨噬细胞RAW264.7的作用 | 第37-40页 |
| 4.6.1 原核表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 4.6.2 蛋白质的小量表达及表达条件的优化 | 第39页 |
| 4.6.3 蛋白质的大量表达及包涵体蛋白的提取 | 第39-40页 |
| 4.7 动物实验—潜伏感染模型的建立 | 第40-41页 |
| 5 结果与分析 | 第41-57页 |
| 5.1 缺失突变体的构建 | 第41-44页 |
| 5.1.1 BCG缺失突变株的构建 | 第41-44页 |
| 5.2 缺失突变株BCGΔWag22菌落形态的变化 | 第44-45页 |
| 5.3 生长曲线的测定 | 第45-46页 |
| 5.4 吞噬存活实验 | 第46页 |
| 5.5 BCG?Wag22对RAW264.7细胞毒性实验 | 第46-47页 |
| 5.6 原核表达结核分枝杆菌PE-PGRS家族蛋白Wag22 | 第47-52页 |
| 5.6.1 目的蛋白Wag22理化性质和二级结构的分析 | 第47-49页 |
| 5.6.2 原核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 5.6.3 蛋白Wag22的诱导表达及表达条件的优化 | 第50-51页 |
| 5.6.4 包涵体蛋白的提取、纯化及Western blot验证 | 第51-52页 |
| 5.7 动物实验—潜伏感染模型的建立 | 第52-57页 |
| 5.7.1 体重的监测 | 第52-53页 |
| 5.7.2 相关病理变化 | 第53-56页 |
| 5.7.3 细胞因子的变化 | 第56-57页 |
| 6 讨论 | 第57-59页 |
| 6.1 新型结核缺失突变株的构建方法分析 | 第57页 |
| 6.2 PE-PGRS家族蛋白Wag22 | 第57-58页 |
| 6.3 细胞因子与免疫反应 | 第58-59页 |
| 7 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
