摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
1 前言 | 第12-17页 |
1.1 KCTD10 | 第12-14页 |
1.1.1 KCTD10基因 | 第12页 |
1.1.2 KCTD10的表达及功能 | 第12-14页 |
1.2 神经胶质瘤的特点及研究 | 第14-17页 |
2 材料和方法 | 第17-35页 |
2.1 组织样本和细胞 | 第17页 |
2.2 KCTD10的siRNA慢病毒和所用抗体及引物 | 第17-18页 |
2.3 试剂 | 第18页 |
2.4 溶液的配制 | 第18-21页 |
2.4.1 Western blot实验所需试剂 | 第18-19页 |
2.4.2 明胶酶谱实验所需试剂 | 第19-21页 |
2.5 仪器设备 | 第21-22页 |
2.6 组织样本的收集和保存 | 第22-23页 |
2.7 细胞实验操作 | 第23-27页 |
2.7.1 细胞的解冻 | 第23页 |
2.7.2 细胞的传代培养 | 第23页 |
2.7.3 细胞的冻存 | 第23-24页 |
2.7.4 慢病毒转染 | 第24-26页 |
2.7.5 划痕实验 | 第26页 |
2.7.6 transwell小室侵袭及迁移实验 | 第26-27页 |
2.8 样本的western blot检测 | 第27-31页 |
2.8.1 组织样本蛋白提取 | 第27-28页 |
2.8.2 细胞样本蛋白提取 | 第28页 |
2.8.3 蛋白样本浓度测定 | 第28-29页 |
2.8.4 SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
2.8.5 转膜 | 第30页 |
2.8.6 封闭 | 第30页 |
2.8.7 抗体孵育 | 第30-31页 |
2.8.8 显色 | 第31页 |
2.9 样本的Real-time PCR检测 | 第31-33页 |
2.9.1 前期处理 | 第31页 |
2.9.2 总RNA提取 | 第31-32页 |
2.9.3 逆转录c DNA | 第32页 |
2.9.4 Real-time PCR检测 | 第32-33页 |
2.10 明胶酶谱实验 | 第33-34页 |
2.11 统计学分析 | 第34-35页 |
3 结果与分析 | 第35-43页 |
3.1 KCTD10在神经胶质瘤中蛋白水平的表达 | 第35-36页 |
3.2 KCTD10在神经胶质瘤细胞株里的表达 | 第36页 |
3.3 本底高表达KCTD10细胞株的慢病毒转染 | 第36-37页 |
3.4 干扰KCTD10慢病毒沉默效率的检测 | 第37-38页 |
3.5 划痕实验检测慢病毒转染后细胞的迁移能力 | 第38-39页 |
3.6 Transwell实验检测慢病毒转染后细胞的侵袭与转移能力 | 第39-40页 |
3.7 沉默 KCTD10 后与侵袭发生相关基因的表达 | 第40-42页 |
3.8 明胶酶谱法检测沉默KCTD10后细胞活性MMP2释放 | 第42-43页 |
4 讨论 | 第43-46页 |
5 结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-51页 |
综述 | 第51-56页 |
参考文献 | 第54-56页 |
英文缩写表 | 第56-57页 |
攻读硕士学位期间的主要成果 | 第57-58页 |
致谢 | 第58页 |