| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-19页 |
| 0.1 结直肠癌 | 第13-14页 |
| 0.2 核心蛋白聚糖 | 第14-15页 |
| 0.3 肿瘤微环境 | 第15-16页 |
| 0.4 EMT：上皮间质转换 | 第16-17页 |
| 0.5 研究目的及意义 | 第17-19页 |
| 第1章 构建DCN原核表达系统及其纯化和活性评价 | 第19-34页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 实验材料 | 第19-23页 |
| 1.2.1 菌株、质粒、引物、细胞株、生化试剂和耗材 | 第19-21页 |
| 1.2.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.2.3 试剂的配制 | 第22-23页 |
| 1.3 实验方法及步骤 | 第23-29页 |
| 1.3.1 DCN表达质粒的构建 | 第23-25页 |
| 1.3.2 DCN重组蛋白的表达 | 第25页 |
| 1.3.3 DCN重组蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| 1.3.4 HCT116和LOVO细胞的培养 | 第26-27页 |
| 1.3.5 细胞总蛋白质的提取和浓度测定(BCA法) | 第27页 |
| 1.3.6 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第27-28页 |
| 1.3.7 细胞划痕实验 | 第28-29页 |
| 1.4 实验结果与讨论 | 第29-33页 |
| 1.4.1 构建重组质粒pFLAG-ATS-DCN | 第29-30页 |
| 1.4.2 DCN重组质粒的表达 | 第30-31页 |
| 1.4.3 DCN重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 1.4.4 DCN重组蛋白抑制结肠癌细胞增殖 | 第32-33页 |
| 1.4.5 DCN重组蛋白抑制结肠癌细胞转移 | 第33页 |
| 1.5 结论 | 第33-34页 |
| 第2章 DCN过表达在微环境中对结肠癌细胞发生EMT的行为学变化研究 | 第34-41页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.2.1 细胞系、生化试剂和耗材 | 第34-35页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第35页 |
| 2.2.3 试剂的配制 | 第35页 |
| 2.3 实验方法及步骤 | 第35-37页 |
| 2.3.1 细胞间接共培养模型的建立 | 第35页 |
| 2.3.2 结肠成纤维细胞CCD-18CO条件培养基(CM)的收集 | 第35-36页 |
| 2.3.3 细胞侵袭实验 | 第36-37页 |
| 2.3.4 细胞迁移实验 | 第37页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第37-40页 |
| 2.4.1 构建DCN过表达的微环境 | 第37-38页 |
| 2.4.2 在肿瘤微环境中,DCN过表达抑制LOVO细胞的迁移 | 第38-39页 |
| 2.4.3 在肿瘤微环境中,DCN过表达抑制LOVO细胞的侵袭 | 第39-40页 |
| 2.5 结论 | 第40-41页 |
| 第3章 DCN过表达在微环境中对结肠癌细胞发生EMT的机制作用研究 | 第41-49页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-44页 |
| 3.3.1 构建DCN过表达的3D细胞共培养模型 | 第42页 |
| 3.3.2 ELISA检测细胞培养基中的MMP2、MMP9(试剂盒) | 第42-43页 |
| 3.3.3 收集微环境中过表达DCN处理下的结肠癌LOVO细胞 | 第43-44页 |
| 3.3.4 Western blot | 第44页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第44-48页 |
| 3.4.1 ELISA检测过表达DCN的肿瘤微环境中MMP2含量降低 | 第44-45页 |
| 3.4.2 ELISA检测过表达DCN的肿瘤微环境中MMP9含量降低 | 第45-46页 |
| 3.4.3 Western blot检测DCN过表达在肿瘤微环境中抑制结肠癌细胞EMT | 第46-48页 |
| 3.5 结论 | 第48-49页 |
| 第4章 结论与展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第57页 |
