| 论文创新点 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 A型流感病毒研究进展 | 第12-40页 |
| 1.1 概述 | 第12-14页 |
| 1.2 A型流感病毒的形态结构 | 第14-15页 |
| 1.3 A型流感病毒基因组结构及编码蛋白质 | 第15-30页 |
| 1.3.1 结构蛋白 | 第15-26页 |
| 1.3.1.1 RNP复合物蛋白 | 第15-19页 |
| 1.3.1.2 膜蛋白 | 第19-26页 |
| 1.3.1.3 基质蛋白 | 第26页 |
| 1.3.2 非结构蛋白 | 第26-30页 |
| 1.4 A型流感病毒的生活史 | 第30-33页 |
| 1.4.1 病毒颗粒进入 | 第30-31页 |
| 1.4.2 vRNPs入核 | 第31页 |
| 1.4.3 基因组的转录和翻译 | 第31-32页 |
| 1.4.4 病毒颗粒的组装和释放 | 第32-33页 |
| 1.5 A型流感病毒哺乳动物致病机制 | 第33-37页 |
| 1.6 A型流感病毒反向遗传操作技术 | 第37-39页 |
| 1.7 本论文的研究目的和意义 | 第39-40页 |
| 第二章 实验材料与实验方法 | 第40-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第40-42页 |
| 2.1.1 细胞、菌株、病毒株、载体和实验动物 | 第40页 |
| 2.1.2 抗体、试剂和试剂盒 | 第40页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2.1.4 相关试剂的配制 | 第41-42页 |
| 2.2 方法 | 第42-52页 |
| 2.2.1 病毒鸡胚扩增 | 第42页 |
| 2.2.2 病毒MDCK细胞扩增 | 第42页 |
| 2.2.3 血凝效价测定 | 第42-43页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| 2.2.5 DNA的转化 | 第44页 |
| 2.2.6 病毒RNA的提取 | 第44页 |
| 2.2.7 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增基因组片 | 第44-45页 |
| 2.2.8 DNA片段凝胶电泳及回收 | 第45-46页 |
| 2.2.9 反向遗传重组质粒构建 | 第46页 |
| 2.2.10 荧光素酶报告质粒构建 | 第46-47页 |
| 2.2.11 点突变 | 第47-48页 |
| 2.2.12 细胞转染及病毒拯救 | 第48页 |
| 2.2.13 空斑实验 | 第48-49页 |
| 2.2.14 MLD_(50) | 第49页 |
| 2.2.15 生长曲线测定 | 第49页 |
| 2.2.16 鸡静脉注射毒力指数(IVPI)测定 | 第49-50页 |
| 2.2.17 小鼠感染和肺组织匀浆制备 | 第50页 |
| 2.2.18 小鼠肺组织病理切片及HE染色 | 第50-51页 |
| 2.2.19 RNP活性检测 | 第51页 |
| 2.2.20 病毒小鼠传代 | 第51-52页 |
| 第三章 两株H5N1禽流感病毒分离株的特性和致病性 | 第52-66页 |
| 3.1 HB04和HN05毒株对鸡和小鼠的致病性 | 第52-55页 |
| 3.2 病毒在DF-1、MDCK和A549的增殖曲线及空斑特性 | 第55-56页 |
| 3.3 HB04和HN05反向遗传重组质粒构建及鉴定 | 第56-58页 |
| 3.4 HB04和HN05禽流感病毒基因组序列分析 | 第58页 |
| 3.5 重组病毒拯救及生长特性 | 第58-59页 |
| 3.6 病毒基因在重组病毒小鼠致病性中的作用 | 第59-60页 |
| 3.7 单基因替换对RNP活性的影响 | 第60-62页 |
| 3.8 聚合酶基因对重组病毒在小鼠肺组织复制的影响 | 第62页 |
| 3.9 聚合酶基因对小鼠毒力和致病性影响 | 第62-63页 |
| 3.10 讨论 | 第63-66页 |
| 第四章 H5N1禽流感病毒小鼠适应的分子基础 | 第66-80页 |
| 4.1 H5N1禽流感病毒HB04株小鼠传代对致病性的影响 | 第67-69页 |
| 4.2 HB04和HB04M在细胞中复制特性 | 第69-70页 |
| 4.3 HB04M与HB04基因组序列测定及分析 | 第70-71页 |
| 4.4 聚合酶基因是决定HB04M小鼠高致病性的关键因素 | 第71-72页 |
| 4.5 聚合酶基因及其突变位点对RNP活性的影响 | 第72-74页 |
| 4.6 PB2 E627K、PB1 I205V和PA V474A突变对重组病毒在小鼠组织器官分布的影响 | 第74-75页 |
| 4.7 PB2 E627K、PB1 I205V和PA V474A突变是病毒引起小鼠肺组织病理损伤的关键位点 | 第75-77页 |
| 4.8 讨论 | 第77-80页 |
| 研究总结与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 附表1 点突变引物 | 第96-97页 |
| 附录2 HB04、HN05全基因组序列 | 第97-111页 |
| 硕博连读期间发表与待发表的文章 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
