| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 弧菌概述 | 第13页 |
| 1.2 鳗弧菌概述 | 第13-17页 |
| 1.2.1 分类学地位及生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.2.2 鳗弧菌病 | 第14页 |
| 1.2.3 鳗弧菌致病因子 | 第14-16页 |
| 1.2.3.1 铁螫合系统 | 第14-15页 |
| 1.2.3.2 胞外产物 | 第15页 |
| 1.2.3.3 趋化作用和运动性 | 第15页 |
| 1.2.3.4 LPS | 第15页 |
| 1.2.3.5 胞外多糖 | 第15-16页 |
| 1.2.3.6 外膜蛋白 | 第16页 |
| 1.2.3.7 密度感应系统 | 第16页 |
| 1.2.4 鳗弧菌病的防治 | 第16-17页 |
| 1.3 T6SS系统 | 第17-21页 |
| 1.3.1 T6SS的结构 | 第17-19页 |
| 1.3.1.1 Hcp | 第17页 |
| 1.3.1.2 VgrG | 第17-18页 |
| 1.3.1.3 TssB/TssC(VipA/VipB) | 第18页 |
| 1.3.1.4 TssE | 第18页 |
| 1.3.1.5 TagL/TssL、TssJ、TssM | 第18-19页 |
| 1.3.2 T6SS的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2.1 增强对宿主的致病性 | 第19页 |
| 1.3.2.2 减少宿主的致病性 | 第19-20页 |
| 1.3.2.3 介导与其他细菌的相互作用 | 第20页 |
| 1.3.2.4 提高对环境的适应性 | 第20页 |
| 1.3.3 T6SS研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 密度感应系统 | 第21-22页 |
| 1.4.1 弧菌的密度感应系统 | 第21页 |
| 1.4.2 AHL信号分子 | 第21页 |
| 1.4.3 鳗弧菌的密度感应系统 | 第21-22页 |
| 1.5 本论文研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 环境因子对鳗弧菌MHK3T6SS表达和分泌的影响 | 第24-38页 |
| 引言 | 第24页 |
| 2.1 材料和方法 | 第24-31页 |
| 2.1.1 菌株、培养基、抗体、引物 | 第24-25页 |
| 2.1.2 不同培养条件细菌培养物的制备 | 第25-26页 |
| 2.1.3 qRT-PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.1.3.1 细菌总RNA的提取 | 第26页 |
| 2.1.3.2 消化样品中的DNA | 第26-27页 |
| 2.1.3.3 RNA反转录 | 第27页 |
| 2.1.3.4 qRT-PCR检测Hcp的表达 | 第27-28页 |
| 2.1.4 Western blot检测Hcp的表达和分泌 | 第28-29页 |
| 2.1.4.1 胞外和胞内蛋白组分的制备和提取 | 第28-29页 |
| 2.1.4.2 Western blot分析蛋白分泌和表达 | 第29页 |
| 2.1.5 Hcp的稳定性检测 | 第29-30页 |
| 2.1.6 数据分析 | 第30-31页 |
| 2.2 实验结果 | 第31-36页 |
| 2.2.1 不同培养温度对鳗弧菌Hcp表达和分泌的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.2 不同盐度对Hcp表达和分泌的影响 | 第32-33页 |
| 2.2.3 不同pH对MHK3 Hcp表达和分泌的影响 | 第33-35页 |
| 2.2.4 Hcp的稳定性 | 第35-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-38页 |
| 3 密度感应系统调节因子luxO对鳗弧菌MHK3 T6SS表达和分泌的影响 | 第38-51页 |
| 引言 | 第38页 |
| 3.1 材料和方法 | 第38-44页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第38-40页 |
| 3.1.2 luxO突变菌株的构建 | 第40-43页 |
| 3.1.2.1 原理 | 第40页 |
| 3.1.2.2 引物设计 | 第40-41页 |
| 3.1.2.3 luxO基因缺失片段的构建 | 第41页 |
| 3.1.2.4 重组自杀质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.2.5 接合 | 第42-43页 |
| 3.1.2.6 二次同源重组和突变株的筛选 | 第43页 |
| 3.1.3 突变株及其野生株的生长曲线测定 | 第43-44页 |
| 3.1.3.1 在TSB培养条件下各菌株的生长曲线测定 | 第43页 |
| 3.1.3.2 在2216E海水培养条件下各菌株的生长曲线测定 | 第43-44页 |
| 3.1.4 突变菌及野生株Hcp在不同生长期分泌表达的分析 | 第44页 |
| 3.1.4.1 qRT-PCR分析Hcp mRNA表达 | 第44页 |
| 3.1.4.2 Western blot分析Hcp的表达和分泌 | 第44页 |
| 3.1.5 数据分析 | 第44页 |
| 3.2 实验结果 | 第44-49页 |
| 3.2.1 luxO突变菌株的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.2 突变株及其野生株的生长曲线测定 | 第45-47页 |
| 3.2.3 突变菌及野生株Hcp在不同生长期的表达和分泌 | 第47-49页 |
| 3.2.3.1 qRT-PCR分析Hcp的表达 | 第47-48页 |
| 3.2.3.2 Western blot分析Hcp的表达和分泌 | 第48-49页 |
| 3.3 讨论 | 第49-51页 |
| 4 T6SS介导的鳗弧菌MHK3的抑菌作用 | 第51-61页 |
| 引言 | 第51页 |
| 4.1 材料和方法 | 第51-55页 |
| 4.1.1 实验菌株、培养基 | 第51-52页 |
| 4.1.2 从海水环境中分离E.coli及利福平抗性菌株的筛选 | 第52-53页 |
| 4.1.3 鳗弧菌与E.tarda的共培养体系及细菌计数 | 第53-54页 |
| 4.1.4 鳗弧菌与E.coli的共培养体系及细菌计数 | 第54-55页 |
| 4.2 结果 | 第55-58页 |
| 4.2.1 环境中E.coli的分离及利福平抗性菌株的筛选 | 第55页 |
| 4.2.2 鳗弧菌对E. tarda的抑制效果 | 第55-57页 |
| 4.2.3 鳗弧菌对E. coli的抑制效果 | 第57-58页 |
| 4.3 讨论 | 第58-60页 |
| 4.4 总结和展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
