| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 1. 引言 | 第10-21页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶简介 | 第10页 |
| ·APX的反应机制 | 第10-12页 |
| ·APX基因家族概述 | 第12-13页 |
| ·APX酶在细胞中的定位 | 第13-14页 |
| ·APX基因的分子生物学研究 | 第14-16页 |
| ·核酸信息 | 第14页 |
| ·氨基酸信息 | 第14-15页 |
| ·APX基因的克隆 | 第15-16页 |
| ·APX基因的酶学特征及研究现状 | 第16-19页 |
| ·APX的酶学特征 | 第16-17页 |
| ·酶活性的研究 | 第17-19页 |
| ·APX基因的表达分析 | 第19-20页 |
| ·基因的表达 | 第19页 |
| ·APX转基因的正义表达和反义表达 | 第19-20页 |
| ·APX研究目的及展望 | 第20-21页 |
| 2. 毛白杨APX基因的克隆 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·电子克隆实验材料 | 第21页 |
| ·APX基因克隆实验材料 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·毛果杨APX基因电子克隆的方法 | 第21-22页 |
| ·毛白杨APX基因克隆的方法 | 第22-26页 |
| ·试剂准备及仪器预处理 | 第22页 |
| ·提取RNA | 第22页 |
| ·逆转录 | 第22-23页 |
| ·设计引物 | 第23页 |
| ·PCR反应 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第24页 |
| ·PCR产物与pMD19-T载体连接 | 第24页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌JM109 | 第24-25页 |
| ·鉴定转化结果及菌液测序 | 第25-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-29页 |
| ·毛果杨APX基因电子克隆的结果 | 第26-27页 |
| ·大豆AY466858序列的获得 | 第26-27页 |
| ·毛果杨APX基因序列的获得 | 第27页 |
| ·毛白杨APX基因克隆的结果 | 第27-29页 |
| ·RNA提取结果 | 第27-28页 |
| ·APX-Ⅰ和APX-Ⅱ的引物PCR结果 | 第28页 |
| ·毛白杨APX基因测序结果 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 3. 毛白杨APX基因的载体构建及转化 | 第31-48页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·毛白杨APX转基因载体构建的方法 | 第31-33页 |
| ·添加酶切位点的引物设计 | 第31页 |
| ·目的基因片段APX的T载体克隆 | 第31-32页 |
| ·转基因载体PBI121-APX的构建 | 第32-33页 |
| ·毛白杨APX基因转化烟草的方法 | 第33-35页 |
| ·烟草扩繁及敏感性试验 | 第33页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·质粒转化农杆菌感受态细胞 | 第34页 |
| ·农杆菌叶盘法侵染烟草 | 第34-35页 |
| ·转毛白杨APX基因烟草鉴定的方法 | 第35-38页 |
| ·转毛白杨APX基因烟草的PCR检测 | 第35页 |
| ·转毛白杨APX基因烟草的Southern杂交 | 第35-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-46页 |
| ·毛白杨APX转基因载体构建的结果 | 第38-41页 |
| ·添加双酶切位点的APX基因PCR结果 | 第38-39页 |
| ·目的基因APX连接pMD19-T载体及测序结果 | 第39-40页 |
| ·目的基因APX与转基因载体PBI121连接结果 | 第40-41页 |
| ·毛白杨APX基因转化烟草的结果 | 第41-44页 |
| ·Apx-PBI121转化农杆菌感受态细胞的结果 | 第41-42页 |
| ·农杆菌侵染烟草结果 | 第42-44页 |
| ·转毛白杨APX基因烟草鉴定的结果 | 第44-46页 |
| ·转基因烟草的PCR检测 | 第44页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交检测 | 第44-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 4 转APX基因植株的抗逆性分析 | 第48-51页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48页 |
| ·抗盐性分析的实验方法 | 第48页 |
| ·抗旱性分析的实验方法 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-50页 |
| ·抗盐性分析的实验结果 | 第48-49页 |
| ·抗旱性分析的实验结果 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 5 毛白杨APX-Ⅰ在烟草细胞中的表达定位 | 第51-59页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-55页 |
| ·毛白杨APX-I-PBI121-GFP载体构建的方法 | 第51-54页 |
| ·引物设计 | 第51-52页 |
| ·构建PBI121-GFP载体 | 第52-53页 |
| ·构建APX-I-PBI121-GFP载体 | 第53-54页 |
| ·载体转化农杆菌并侵染烟草细胞的方法 | 第54-55页 |
| ·制备烟草悬浮细胞 | 第54页 |
| ·APX-I-PBI121-6FP载体转化农杆菌 | 第54页 |
| ·农杆菌侵染烟草悬浮细胞 | 第54-55页 |
| ·荧光显微镜观察转化细胞 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-58页 |
| ·毛白杨APX-I-PBI121-GFP载体构建的结果 | 第55-57页 |
| ·载体PBI121-GFP构建结果 | 第55-56页 |
| ·载体APX-I-PBI121-GFP构建结果 | 第56-57页 |
| ·载体转化农杆菌并侵染烟草细胞的结果 | 第57-58页 |
| ·APX-I-PBI121-GFP载体转化农杆菌结果 | 第57页 |
| ·荧光显微镜观察结果 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 6 结论及讨论 | 第59-62页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 个人简介 | 第68-69页 |
| 导帅简介 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
