| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-16页 |
| ·流感病毒简述 | 第11-12页 |
| ·病毒颗粒的分子结构 | 第11页 |
| ·流感病毒的基因组结构 | 第11-12页 |
| ·流感病毒的复制 | 第12页 |
| ·mTOR信号通路 | 第12-15页 |
| ·mTOR | 第12-13页 |
| ·mTOR的上游调控分子 | 第13-14页 |
| ·mTOR的下游调控靶点 | 第14-15页 |
| ·mTOR在病毒感染中的作用 | 第15-16页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第16-33页 |
| ·实验材料 | 第16-21页 |
| ·质粒载体 | 第16页 |
| ·细菌菌株 | 第16页 |
| ·细胞株及病毒株 | 第16页 |
| ·主要溶液的配制 | 第16-18页 |
| ·主要工具酶及试剂 | 第18-19页 |
| ·试剂盒 | 第19页 |
| ·主要耗材 | 第19页 |
| ·DNA合成和测序 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-21页 |
| ·实验方法 | 第21-33页 |
| ·细胞复苏及冻存 | 第21页 |
| ·MDCK及A549细胞传代培养 | 第21页 |
| ·流感病毒PR8株的细胞培养 | 第21-22页 |
| ·病毒TCID50测定(组织半数感染量) | 第22-23页 |
| ·流感病毒感染A549细胞 | 第23页 |
| ·LY294002、Rapamycin和Torinl处理A549细胞 | 第23-24页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第24页 |
| ·蛋白免疫印迹(Western-blot) | 第24-26页 |
| ·NS1表达质粒的构建 | 第26-30页 |
| ·外源表达NS1以及相关蛋白磷酸化水平的检测 | 第30-31页 |
| ·检测NS1蛋白表达对荧光素酶报告基因表达活性的影响 | 第31-32页 |
| ·MTT法检测质粒表达NS1蛋白对细胞活力的影响 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-42页 |
| ·流感病毒PR8株感染对mTOR上下游分子的影响 | 第33-35页 |
| ·流感病毒PR8株感染对4E-BP1和Akt磷酸化的影响 | 第33页 |
| ·mTOR及PI3K特异性抑制剂对流感病毒PR8株感染引起的Akt磷酸化和4E-BP1磷酸化的影响 | 第33-35页 |
| ·mTOR及PI3K特异性抑制剂对NP蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| ·pcDNA3.1/NS1-his质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·NS1基因PCR产物电泳图谱 | 第36-37页 |
| ·PCR回收产物酶切产物及pcDNA3.1酶切产物电泳图 | 第37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·质粒表达NS1蛋白对Akt和4E-BP1的磷酸化的影响 | 第38-39页 |
| ·质粒表达NS1蛋白对荧光素酶报告基因表达活性的影响 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 附录A | 第48-50页 |
| 附录B | 第50-52页 |
| 作者简历 | 第52-54页 |
| 学位论文数据集 | 第54页 |
