| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| ·5-羟基色氨酸简介 | 第12-15页 |
| ·5-羟基色氨酸理化性质 | 第12-13页 |
| ·基本结构和代谢过程 | 第13页 |
| ·5-羟基色氨酸的生理功能和药理作用 | 第13-14页 |
| ·5-羟基色氨酸目前的生产工艺及方法 | 第14页 |
| ·5-羟基色氨酸的测定方法 | 第14-15页 |
| ·色氨酸羟化酶(TPH) | 第15-17页 |
| ·色氨酸羟化酶-2基因 | 第15-16页 |
| ·色氨酸羟化酶的生理功能 | 第16页 |
| ·色氨酸羟化酶的结构特征 | 第16-17页 |
| ·大肠杆菌表达系统的研究 | 第17-19页 |
| ·大肠杆菌表达宿主菌和载体 | 第17页 |
| ·大肠杆菌表达系统的组成 | 第17-18页 |
| ·常见的大肠杆菌表达系统 | 第18页 |
| ·培养条件的控制 | 第18-19页 |
| ·培养条件的控制 | 第19页 |
| ·毕赤酵母(P.PASTORIS)表达系统概述 | 第19-24页 |
| ·毕赤酵母表达体系的特点 | 第20-21页 |
| ·常用比赤酵母表达系统载体 | 第21页 |
| ·外源基因在酵母中的表达方式 | 第21-22页 |
| ·重组蛋白在酵母表达系统中的表达 | 第22-24页 |
| ·生物转化 | 第24-26页 |
| ·微生物转化特点及一般过程 | 第24页 |
| ·微生物转化的优点 | 第24-25页 |
| ·微生物转化的方法 | 第25页 |
| ·与5-色氨酸相关微生物转化方面的应用 | 第25-26页 |
| ·研究背景及思路 | 第26-28页 |
| ·研究背景及意义 | 第26-27页 |
| ·研究思路 | 第27-28页 |
| 第二章 色氨酸羟化酶-2的原核表达载体的构建及表达 | 第28-46页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第29页 |
| ·仪器、工具酶和化学试剂 | 第29页 |
| ·目的基因的获得及PCR引物 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·表达载体构建的实验方法 | 第30-34页 |
| ·色氨酸羟化酶目的基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·PET质粒和PGEX-4T-1质粒的提取及酶切 | 第31-32页 |
| ·PCR产物与T载体的连接的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌DH5α和BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·连接产物的转化及验证 | 第33页 |
| ·从T载体上获得目的基因 | 第33页 |
| ·定向连接 | 第33-34页 |
| ·连接产物转化大肠BL21(DE3)感受态细胞 | 第34页 |
| ·重组质粒在BL21(DE3)中的表达的实验方法 | 第34-35页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第34页 |
| ·大肠杆菌生长曲线的测定 | 第34页 |
| ·诱导表达条件优化 | 第34-35页 |
| ·超声波破碎大肠杆菌 | 第35页 |
| ·包涵体复性及活性检测 | 第35-36页 |
| ·包涵体复性 | 第35-36页 |
| ·复性蛋白活性检测 | 第36页 |
| ·实验结果与讨论 | 第36-44页 |
| ·PCR扩增及产物回收 | 第36页 |
| ·阳性克隆筛选验证 | 第36-37页 |
| ·重组质粒构建 | 第37-38页 |
| ·重组菌株的构建及PCR验证 | 第38-41页 |
| ·重组菌株生长曲线的测定 | 第41-42页 |
| ·外源蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·包涵体复性及活性检测 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 色氨酸羟化酶-2真核表达质粒的构建及表达 | 第46-58页 |
| ·引言 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·仪器、试剂盒、工具酶、化学试剂 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·pPICZαA质粒提取及酶切 | 第47-48页 |
| ·目的基因与表达载体连接 | 第48页 |
| ·连接产物转化E.coli并验证 | 第48页 |
| ·重组质粒线性化 | 第48-49页 |
| ·P.pastoris感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·线性化质粒电转P.pastoris | 第49-50页 |
| ·PCR验证 | 第50页 |
| ·甲醇利用HIS~+Mut~+表型的检测 | 第50页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·生长曲线的测定 | 第51页 |
| ·三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白 | 第51页 |
| ·超声破碎细胞 | 第51-52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-57页 |
| ·pPICZα和pPIC3.5K酶切及回收纯化 | 第52页 |
| ·菌落PCR筛选DH5α(pPICZαA-TPH、pPIC3.5K-TPH)阳性转化子 | 第52-53页 |
| ·重组质粒酶切验证 | 第53-54页 |
| ·重组菌P.pastoris GS115构建及验证 | 第54-55页 |
| ·生长曲线的测定 | 第55-56页 |
| ·毕赤酵母表达SDS-PAGE电泳 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 5-羟基色氨酸微生物转化菌株的筛选 | 第58-64页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第58-59页 |
| ·实验试剂及常用实验仪器 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·微生物菌株 | 第59页 |
| ·5-羟基色氨酸的检测方法 | 第59页 |
| ·试验方法 | 第59-61页 |
| ·5-HTP高效液相色谱标准曲线 | 第59页 |
| ·菌株的培养 | 第59-60页 |
| ·底物的底物的处理及添加 | 第60页 |
| ·对照组的设立 | 第60页 |
| ·发酵液处理及初步纯化 | 第60页 |
| ·菌体处理及初步纯化 | 第60-61页 |
| ·HPLC检测 | 第61页 |
| ·实验结果与分析 | 第61-64页 |
| ·高效液相的标准曲线的绘制 | 第61-63页 |
| ·生物转化过程的初步成果及小结 | 第63-64页 |
| 第五章 5-羟基色氨酸减肥效果的小鼠验证实验 | 第64-70页 |
| ·实验材料与仪器 | 第64-65页 |
| ·实验用小鼠 | 第64页 |
| ·药物与主要试剂 | 第64页 |
| ·实验仪器 | 第64-65页 |
| ·对照组药物的制备及用法 | 第65页 |
| ·阳性对照 | 第65页 |
| ·空白对照组 | 第65页 |
| ·试验方法 | 第65-66页 |
| ·小鼠分组及饲养方法 | 第65页 |
| ·药品灌胃方法 | 第65页 |
| ·小鼠体重变化数据收集 | 第65页 |
| ·实验后小鼠处理 | 第65-66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-70页 |
| 第六章 结论与建议 | 第70-72页 |
| ·研究结论 | 第70-71页 |
| ·建议 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第84-86页 |
| 作者和导师简介 | 第86-89页 |
| 北京化工大学 | 第89页 |
