| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第12-14页 |
| 1.1.1 薄荷醇简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 薄荷醇研究的意义 | 第13-14页 |
| 1.2 光学纯薄荷醇的制备方法 | 第14-20页 |
| 1.2.1 制备手性药物一般方法 | 第14页 |
| 1.2.2 L-薄荷醇合成制备 | 第14-16页 |
| 1.2.3 L-薄荷醇的手性拆分 | 第16-19页 |
| 1.2.4 薄荷醇拆分代表性生物拆分工艺 | 第19-20页 |
| 1.2.5 薄荷醇制备方法比较 | 第20页 |
| 1.3 脂肪酶基因克隆与表达 | 第20-23页 |
| 1.3.1 脂肪酶简介 | 第20-21页 |
| 1.3.2 脂肪酶基因克隆 | 第21-22页 |
| 1.3.3 基因表达研究 | 第22-23页 |
| 1.4 本文研究思路 | 第23-24页 |
| 第二章 PAL的基因克隆和表达 | 第24-46页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 材料和方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.3 菌种和质粒 | 第26页 |
| 2.2.4 试剂配制 | 第26-28页 |
| 2.2.5 培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.6 薄荷醇丙酸酯合成 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.3.1 P.alcaligenes X1基因文库构建 | 第29-33页 |
| 2.3.2 阳性克隆子筛选与检测 | 第33-34页 |
| 2.3.3 PAL基因的克隆 | 第34-35页 |
| 2.3.4 脂肪酶基因的表达 | 第35-39页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第39-45页 |
| 2.4.1 目的基因的分子克隆 | 第39-42页 |
| 2.4.2 PAL基因克隆与表达 | 第42-45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 重组PAL酶学性质研究和结构分析 | 第46-66页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 菌种 | 第46页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第47页 |
| 3.2.4 分子生物学软件与网络资源 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-50页 |
| 3.3.1 重组脂肪酶PAL表达条件的优化 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组PAL纯化 | 第48页 |
| 3.3.3 PAL水解酶活测定 | 第48-49页 |
| 3.3.4 酶学性质研究 | 第49-50页 |
| 3.3.5 PAL拆分活力测定 | 第50页 |
| 3.3.6 蛋白质基本理化性质 | 第50页 |
| 3.3.7 蛋白质同源对比分析以及催化中心分析 | 第50页 |
| 3.3.8 同源建模 | 第50页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第50-65页 |
| 3.4.1 重组酶PAL表达条件优化 | 第50-55页 |
| 3.4.2 PAL纯化结果 | 第55页 |
| 3.4.3 酶学性质检测结果与分析 | 第55-60页 |
| 3.4.4 重组酶拆分能力检测 | 第60-61页 |
| 3.4.5 PAL结构分析 | 第61-62页 |
| 3.4.6 PAL序列同源性分析以及进化关系 | 第62-64页 |
| 3.4.7 同源建模 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 SML基因克隆与表达 | 第66-75页 |
| 4.1 前言 | 第66页 |
| 4.2 材料与方法 | 第66页 |
| 4.3 实验方法 | 第66-68页 |
| 4.3.1 基因文库构建 | 第66页 |
| 4.3.2 阳性克隆自的筛选与检测 | 第66-67页 |
| 4.3.3 SML基因克隆 | 第67页 |
| 4.3.4 表达载体的构建 | 第67-68页 |
| 4.3.5 SML拆分能力检测 | 第68页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第68-73页 |
| 4.4.1 目的基因的分子克隆 | 第68-71页 |
| 4.4.2 重组SML基因克隆与表达 | 第71-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-75页 |
| 第五章 SML酶学性质研究和结构分析 | 第75-89页 |
| 5.1 引言 | 第75页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第75页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第75-88页 |
| 5.3.1 重组酶SML表达条件的优化 | 第75-79页 |
| 5.3.2 SML纯化结果 | 第79-80页 |
| 5.3.3 酶学性质检测结果与分析 | 第80-84页 |
| 5.3.4 SML结构预测 | 第84-85页 |
| 5.3.5 SML序列同源性分析以及进化关系 | 第85-87页 |
| 5.3.6 同源建模 | 第87-88页 |
| 5.4 本章小结 | 第88-89页 |
| 第六章 结论与展望 | 第89-91页 |
| 6.1 结论 | 第89-90页 |
| 6.1.1 PAL的克隆和表达 | 第89页 |
| 6.1.2 SML的克隆与表达 | 第89-90页 |
| 6.2 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
| 附录 | 第96-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |