| 摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 前言 | 第13-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要配制的试剂 | 第20-23页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.5 质粒、菌株、细胞株及实验动物 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 带有HIS-CBP-SBP串联亲和纯化标签的原核表达载体的构建 | 第24-31页 |
| 2.2.2 融合蛋白的原核表达及纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.3 细胞培养及目的蛋白穿膜效应检测 | 第32页 |
| 2.2.4 小鼠肝脏组织细胞质膜蛋白的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.5 2-D Quant Kit蛋白定量 | 第33页 |
| 2.2.6 Western-blot检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7 TAP PULL-DOWN | 第34-35页 |
| 2.2.7.1 His标签蛋白纯化树脂下拉 | 第34页 |
| 2.2.7.2 SBP纯化树脂下拉 | 第34-35页 |
| 2.2.8 质谱兼容的蛋白染色 | 第35页 |
| 2.2.8.1 质谱兼容的银染 | 第35页 |
| 2.2.8.2 质谱兼容的改良G-250考染 | 第35页 |
| 2.2.9 质谱鉴定 | 第35-37页 |
| 第三章 结果 | 第37-51页 |
| 3.1 带有HIS-CBP-SBP串联亲和纯化标签的原核表达载体的构建及跨膜效应检测 | 第37-42页 |
| 3.1.1 pET14b-EGFP原核表达载体鉴定 | 第37页 |
| 3.1.2 pET14b-CBP-SBP-EGFP原核表达载体鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.3 pET14b-CBP-SBP-EGFP-TAT原核表达载体鉴定 | 第38-39页 |
| 3.1.4 融合蛋白的纯化 | 第39页 |
| 3.1.5 HCSET融合蛋白跨膜效应的时间\浓度依赖性检测 | 第39-41页 |
| 3.1.6 HE,HCSE,HCSET融合蛋白的穿膜效应比较 | 第41-42页 |
| 3.2 缺失CBP或SBP序列的原核表达载体的构建及跨膜效应比较 | 第42-46页 |
| 3.2.1 缺失CBP或SBP序列的反向PCR结果鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.2 缺失SBP序列的原核表达载体的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 缺失CBP序列的原核表达载体的鉴定 | 第44页 |
| 3.2.4 CBP或SBP序列缺失的融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.5 缺失CBP或SBP序列的融合蛋白在活细胞水平的跨膜效应比较 | 第45-46页 |
| 3.3 质膜蛋白定量结果 | 第46-47页 |
| 3.4 小鼠肝脏质膜蛋白标志物的蛋白免疫印迹分析 | 第47页 |
| 3.5 TAT-PTD相互作用蛋白的鉴定 | 第47-51页 |
| 3.5.1 SDS-PAGE初步分析 | 第47-49页 |
| 3.5.2 质谱鉴定与分析 | 第49-51页 |
| 3.5.2.1 与TAT-PTD相互作用的肝质膜蛋白差异蛋白分析 | 第49-50页 |
| 3.5.2.2 质谱鉴定 | 第50-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-61页 |
| 4.1 TAT跨膜机制的分子基础亟需阐明 | 第51-53页 |
| 4.2 以研究TAT跨膜机制的为目标的TAP系统的建立与优化 | 第53-55页 |
| 4.3 质膜蛋白制备为筛选TAT相互作用膜蛋白提供保障 | 第55-56页 |
| 4.4 串联亲和纯化耦联质谱技术鉴定蛋白复合物的优势 | 第56-58页 |
| 4.5 TAT-PTD相互作用蛋白的鉴定—新的内化机制的提示 | 第58-59页 |
| 4.6 全文总结 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 缩略词表 | 第65-67页 |
| 攻读学位期间成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
