| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| 1.1 单一构型手性药物的重要性 | 第11页 |
| 1.2 单一构型手性中间体的制备 | 第11-13页 |
| 1.2.1 消旋体拆分法 | 第11-12页 |
| 1.2.2 不对称合成法 | 第12-13页 |
| 1.2.3 化学-酶法组合合成 | 第13页 |
| 1.3 手性合成用酶 | 第13-14页 |
| 1.4 生物催化符合绿色化学合成需求 | 第14页 |
| 1.5 工业生物转化工艺的指标参数 | 第14-16页 |
| 1.6 提高生物催化剂比生产率的策略 | 第16-18页 |
| 1.7 本论文研究内容 | 第18-19页 |
| 1.8 | 第19-20页 |
| 1.8.1 酶促拆分制备(S)-环丙烷甲酸 | 第19页 |
| 1.8.2 化学-酶法组合生产(2S)-顺羟基内酰胺 | 第19页 |
| 1.8.3 酶促不对称还原制备(S)4-氯-3-羟基丁酸乙酯 | 第19-20页 |
| 第2章 通过基因异源表达提高西司他汀拆分酶制剂的比生产率 | 第20-41页 |
| 2.1 引言 | 第20-24页 |
| 2.1.1 西司他汀的结构与功能 | 第20-21页 |
| 2.1.2 (S)-(+)-2,2-二甲基环丙烷甲酸的酶法拆分制备 | 第21-24页 |
| 2.2 材料和方法 | 第24-27页 |
| 2.2.1 试剂 | 第24页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第24页 |
| 2.2.3 红球菌ECU1013的筛选、分离 | 第24-25页 |
| 2.2.4 鸟枪基因文库的构建与筛选 | 第25页 |
| 2.2.5 酯酶基因克隆与表达 | 第25页 |
| 2.2.6 酯酶RhEst1的纯化、表征 | 第25-26页 |
| 2.2.7 酶促DmCpCe转化 | 第26页 |
| 2.2.8 (S)-DmCpCa的规模制备 | 第26-27页 |
| 2.2.9 检测 | 第27页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第27-40页 |
| 2.3.1 红球菌ECU 1013的筛选分离 | 第27-28页 |
| 2.3.2 鸟枪法克隆高立体选择性的酯酶 | 第28-29页 |
| 2.3.3 目标酶的亚克隆 | 第29-31页 |
| 2.3.4 重组RhEst1的纯化与分子量测定 | 第31-32页 |
| 2.3.5 RhEst1的生化性质和动力学参数 | 第32-34页 |
| 2.3.6 RhEst1的酰基特异性 | 第34-35页 |
| 2.3.7 两相体系中RhEst1催化消旋DmCpCe酶促拆分 | 第35-37页 |
| 2.3.8 (S)-DmCpCa的规模制备 | 第37-39页 |
| 2.3.9 催化剂性能的比较 | 第39-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第3章 通过酶固定化实现地尔硫卓手性前体合成酶的重复使用 | 第41-69页 |
| 3.1 引言 | 第41-51页 |
| 3.1.1 交联酶聚集体——酶的固定化新方法 | 第41-45页 |
| 3.1.2 地尔硫卓药物简介 | 第45-46页 |
| 3.1.3 地尔硫卓原料药的工业化生产途径 | 第46-47页 |
| 3.1.4 地尔硫卓原料药的化学-酶法制备 | 第47-50页 |
| 3.1.5 沙雷氏菌脂肪酶的固定化以及酶促拆分反应器 | 第50-51页 |
| 3.2 材料和方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第51页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第51页 |
| 3.2.3 脂肪酶的发酵生产 | 第51页 |
| 3.2.4 蛋白质浓度测定 | 第51-52页 |
| 3.2.5 脂肪酶的沉淀与交联 | 第52页 |
| 3.2.6 脂肪酶活力测定 | 第52页 |
| 3.2.7 酶稳定性的测定 | 第52页 |
| 3.2.8 游离酶与固定化酶酶促水解MPGM的重复反应 | 第52-53页 |
| 3.2.9 (±)-MPGM酶促拆分过程放大 | 第53页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第53-67页 |
| 3.3.1 沙雷氏菌脂肪酶的发酵生产 | 第53-54页 |
| 3.3.2 沙雷氏菌脂肪酶交联酶聚集体制备 | 第54-66页 |
| 3.3.3 千克级规模的化学-酶法组合制备(2S)-顺羟基内酰胺 | 第66-67页 |
| 3.4 本章小结 | 第67-69页 |
| 第4章 通过过程优化提高酶促还原制备他汀前体的生产效率 | 第69-96页 |
| 4.1 引言 | 第69-74页 |
| 4.1.1 生物不对称还原制备(S)-CHBE | 第69-72页 |
| 4.1.2 生物还原制备(S)-CHBE的反应介质体系 | 第72-73页 |
| 4.1.3 生物催化法还原制备(S)-CHBE中的辅酶再生 | 第73页 |
| 4.1.4 天蓝色链霉菌叛基还原酶ScCR催化COBE不对称还原的优点及不足 | 第73-74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-77页 |
| 4.2.1 材料 | 第74-75页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第75页 |
| 4.2.3 重组ScCR酶的发酵生产 | 第75-76页 |
| 4.2.4 细胞中NAD’含量测定 | 第76页 |
| 4.2.5 酶促反应条件优化 | 第76页 |
| 4.2.6 (S)4-氯-3-羟基丁酸乙酯的公斤级规模制备 | 第76-77页 |
| 4.2.7 GC分析 | 第77页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第77-94页 |
| 4.3.1 过程分析、评价 | 第77-79页 |
| 4.3.2 ScCR酶的发酵 | 第79-84页 |
| 4.3.3 冻干细胞与新鲜细胞的NAD~+含量分析 | 第84-85页 |
| 4.3.4 COBE和闲-CHBE的pH稳定性考察 | 第85页 |
| 4.3.5 酶促COBE不对称还原反应参数优化 | 第85-89页 |
| 4.3.6 (S)-CHBE的产品提取 | 第89-93页 |
| 4.3.7 催化剂的比生产率分析 | 第93页 |
| 4.3.8 (S)-CHBE生物不对称还原制备的绿色特性 | 第93-94页 |
| 4.4 本章小结 | 第94-96页 |
| 结论和展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 博士在读期间撰写的论文 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
