| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 L-selectin及其胞外区脱落 | 第18-20页 |
| 1.1.1 L-selectin简介 | 第18-19页 |
| 1.1.2 胞外区脱落 | 第19页 |
| 1.1.3 L-selectin胞外区脱落机制 | 第19-20页 |
| 1.2 moesin蛋白及其FERM结构域 | 第20页 |
| 1.3 钙调蛋白(CaM)简介 | 第20-21页 |
| 1.4 L-selectin、moesin-FERM、钙调蛋白(CaM)三者的关系 | 第21-22页 |
| 1.5 蛋白质结构生物学 | 第22-24页 |
| 1.5.1 蛋白质结晶原理 | 第22-23页 |
| 1.5.2 气相扩散法 | 第23-24页 |
| 1.5.3 X射线衍射 | 第24页 |
| 1.6 本文的研究目的 | 第24-26页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第26-44页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料及试剂 | 第26-29页 |
| 2.2.1 质粒 | 第26-27页 |
| 2.2.2 菌株 | 第27页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.4 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 重组质粒的构建 | 第29-34页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第29页 |
| 2.3.2 目的片段克隆 | 第29-32页 |
| 2.3.3 目的基因片段与载体的双酶切 | 第32-33页 |
| 2.3.4 连接 | 第33页 |
| 2.3.5 转化 | 第33-34页 |
| 2.3.6 重组子的鉴定 | 第34页 |
| 2.4 重组蛋白的表达及纯化 | 第34-39页 |
| 2.4.1 重组蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 2.4.2 重组蛋白的纯化 | 第35页 |
| 2.4.3 His-tag蛋白纯化 | 第35-36页 |
| 2.4.4 GST-tag亲和纯化 | 第36-37页 |
| 2.4.5 目的蛋白浓缩 | 第37页 |
| 2.4.6 凝胶过滤层析 | 第37-38页 |
| 2.4.7 柱子再生 | 第38-39页 |
| 2.5 蛋白与多肽相互作用的研究 | 第39-41页 |
| 2.5.1 等温滴定量热实验(ITC) | 第39-40页 |
| 2.5.2 GST-pull down实验 | 第40页 |
| 2.5.3 荧光实验 | 第40-41页 |
| 2.6 蛋白结晶实验 | 第41-44页 |
| 2.6.1 晶体的初筛 | 第41-42页 |
| 2.6.2 晶体的优化 | 第42-43页 |
| 2.6.3 晶体数据的收集 | 第43-44页 |
| 第三章 moesin-FERM蛋白及钙调蛋白(CaM)的分子克隆、表达及纯化 | 第44-56页 |
| 3.1 moesin-FERM蛋白的分子克隆、表达及纯化 | 第44-51页 |
| 3.1.1 moesin-FERM目的片段的克隆 | 第44-45页 |
| 3.1.2 moesin-FERM的表达和纯化 | 第45-48页 |
| 3.1.3 moesin-FERM蛋白高聚体的解聚 | 第48-51页 |
| 3.2 钙调蛋白(CaM)的分子克隆、表达及纯化 | 第51-54页 |
| 3.2.1 钙调蛋白(CaM)的分子克隆 | 第51-52页 |
| 3.2.2 钙调蛋白(CaM)的表达和纯化 | 第52-54页 |
| 3.3 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 moesin-FERM蛋白、钙调蛋白(CaM)与L-selectin肽段相互作用的研究 | 第56-68页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 L-Selectin多肽序列的确定 | 第56-59页 |
| 4.2.1 多肽RRL17和AFII24的质谱结果 | 第56-57页 |
| 4.2.2 多肽RRL17和AFII24的园二色谱分析 | 第57-59页 |
| 4.3 等温滴定量热实验(ITC) | 第59-62页 |
| 4.4 荧光检测实验 | 第62-65页 |
| 4.5 GST-pull down实验 | 第65-68页 |
| 第五章 moesin-FERM与短肽AFII24的共结晶实验 | 第68-86页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第68页 |
| 5.3 moesin-FERM蛋白与多肽AFII24共结晶的筛选 | 第68-71页 |
| 5.3.1 moesin-FERM蛋白的浓缩和定量 | 第68页 |
| 5.3.2 多肽AFII24的分子筛层析 | 第68-69页 |
| 5.3.3 晶体初筛 | 第69-70页 |
| 5.3.4 晶体条件的优化 | 第70-71页 |
| 5.4 F-L-P和P-L-F重组质粒的构建 | 第71-73页 |
| 5.5 F-L-P和P-L-F蛋白的表达纯化 | 第73-76页 |
| 5.6 FERM-Linker-AFII24蛋白结晶实验 | 第76-83页 |
| 5.6.1 FERM-Linker-AFII24初筛 | 第76-81页 |
| 5.6.2 FERM-Linker-AFII24晶体优化 | 第81-83页 |
| 5.6.3 FERM-Linker-AFII24晶体X射线衍射 | 第83页 |
| 5.7 本章小结 | 第83-86页 |
| 第六章 结论与小结 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 附录 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 作者和导师简介 | 第96-97页 |
| 附件 | 第97-98页 |
