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副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞的转录组学分析

摘要第7-9页
Abstract第9-11页
缩略词表(Abbreviation)第12-14页
1 文献综述第14-23页
    1.1 副猪嗜血杆菌研究综述第14-16页
        1.1.1 病原与流行病学第14页
        1.1.2 副猪嗜血杆菌致病机制第14-16页
    1.2 天然免疫第16-18页
        1.2.1 天然免疫与炎症反应第16-17页
        1.2.2 副猪嗜血杆菌诱导的炎症反应第17-18页
    1.3 RNA-seq技术优势与应用第18-20页
        1.3.1 RNA-seq技术优势第18-19页
        1.3.2 RNA-seq技术的应用第19-20页
    1.4 IL-19 的研究进展第20-21页
    1.5 小结与展望第21-23页
2 研究目的与意义第23-24页
3 材料与方法第24-37页
    3.1 实验材料第24-29页
        3.1.1 菌株、载体、细胞和实验动物第24页
        3.1.2 酶、试剂和试剂盒第24-25页
        3.1.3 培养基及抗生素的配置第25页
        3.1.4 主要溶液及其配置第25-26页
        3.1.5 主要仪器及设备第26页
        3.1.6 分子生物学软件第26页
        3.1.7 引物第26-29页
    3.2 实验方法第29-37页
        3.2.1 吞噬试验第29页
        3.2.2 细胞因子mRNA水平的检测第29-30页
        3.2.3 RNA-seq样品的制备和检测第30-31页
        3.2.4 RNA-seq数据分析与整理第31页
        3.2.5 IL-19 生物信息学分析第31-32页
        3.2.6 真核表达质粒pcDNA-IL-19 的构建第32-34页
        3.2.7 siRNA/pcDNA-IL-19 转染(脂质体介导转染法)第34页
        3.2.8 荧光定量PCR检测细胞因子表达第34-35页
        3.2.9 ELISA检测细胞因子的表达第35页
        3.2.10 干扰/过表达IL-19 后,IL-1α 和IL-8 mRNA检测第35页
        3.2.11 仔猪感染实验第35-36页
        3.2.12 统计学分析第36-37页
4 结果与分析第37-53页
    4.1 H. parasuis菌株SH0165和HPS1712对 3D4/21 细胞的抗吞噬作用第37页
    4.2 SH0165和HPS1712感染 3D4/21 细胞后细胞因子mRNA表达第37-38页
    4.3 RNA样品质量检测第38-39页
    4.4 RNA-seq结果及差异表达基因聚类分析第39-40页
    4.5 差异表达基因Gene Ontology分析第40-42页
    4.6 差异表达基因KEGG分析第42-45页
    4.7 荧光定量验证RNA-seq结果第45-47页
    4.8 猪源IL-19 的多序列比对和进化树分析第47-48页
    4.9 SH0165和HPS1712感染 3D4/21 细胞后表达检测第48-49页
    4.10 IL-19 在H. parasuis感染过程中的功能研究第49-51页
        4.10.1 干扰IL-19 后细胞因子的检测第49-50页
        4.10.2 过表达IL-19 后细胞因子的检测第50-51页
    4.11 SH0165和HPS1712感染仔猪后IL-19 的检测第51-53页
        4.11.1 感染前仔猪H. parasuis抗体检测第51-52页
        4.11.2 仔猪感染后临床症状观察第52页
        4.11.3 SH0165和HPS1712感染仔猪血清IL-19 检测第52-53页
5 讨论第53-58页
    5.1 SH0165和HPS1712的抗吞噬试验第53页
    5.2 SH0165和HPS1712感染 3D4/21 引起细胞因子的差异第53-54页
    5.3 RNA-seq的数据分析第54-56页
    5.4 IL-19 的功能验证第56-58页
6 结论第58-59页
参考文献第59-67页
附表第67-70页
致谢第70页

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