摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词表(Abbreviation) | 第12-14页 |
1 文献综述 | 第14-23页 |
1.1 副猪嗜血杆菌研究综述 | 第14-16页 |
1.1.1 病原与流行病学 | 第14页 |
1.1.2 副猪嗜血杆菌致病机制 | 第14-16页 |
1.2 天然免疫 | 第16-18页 |
1.2.1 天然免疫与炎症反应 | 第16-17页 |
1.2.2 副猪嗜血杆菌诱导的炎症反应 | 第17-18页 |
1.3 RNA-seq技术优势与应用 | 第18-20页 |
1.3.1 RNA-seq技术优势 | 第18-19页 |
1.3.2 RNA-seq技术的应用 | 第19-20页 |
1.4 IL-19 的研究进展 | 第20-21页 |
1.5 小结与展望 | 第21-23页 |
2 研究目的与意义 | 第23-24页 |
3 材料与方法 | 第24-37页 |
3.1 实验材料 | 第24-29页 |
3.1.1 菌株、载体、细胞和实验动物 | 第24页 |
3.1.2 酶、试剂和试剂盒 | 第24-25页 |
3.1.3 培养基及抗生素的配置 | 第25页 |
3.1.4 主要溶液及其配置 | 第25-26页 |
3.1.5 主要仪器及设备 | 第26页 |
3.1.6 分子生物学软件 | 第26页 |
3.1.7 引物 | 第26-29页 |
3.2 实验方法 | 第29-37页 |
3.2.1 吞噬试验 | 第29页 |
3.2.2 细胞因子mRNA水平的检测 | 第29-30页 |
3.2.3 RNA-seq样品的制备和检测 | 第30-31页 |
3.2.4 RNA-seq数据分析与整理 | 第31页 |
3.2.5 IL-19 生物信息学分析 | 第31-32页 |
3.2.6 真核表达质粒pcDNA-IL-19 的构建 | 第32-34页 |
3.2.7 siRNA/pcDNA-IL-19 转染(脂质体介导转染法) | 第34页 |
3.2.8 荧光定量PCR检测细胞因子表达 | 第34-35页 |
3.2.9 ELISA检测细胞因子的表达 | 第35页 |
3.2.10 干扰/过表达IL-19 后,IL-1α 和IL-8 mRNA检测 | 第35页 |
3.2.11 仔猪感染实验 | 第35-36页 |
3.2.12 统计学分析 | 第36-37页 |
4 结果与分析 | 第37-53页 |
4.1 H. parasuis菌株SH0165和HPS1712对 3D4/21 细胞的抗吞噬作用 | 第37页 |
4.2 SH0165和HPS1712感染 3D4/21 细胞后细胞因子mRNA表达 | 第37-38页 |
4.3 RNA样品质量检测 | 第38-39页 |
4.4 RNA-seq结果及差异表达基因聚类分析 | 第39-40页 |
4.5 差异表达基因Gene Ontology分析 | 第40-42页 |
4.6 差异表达基因KEGG分析 | 第42-45页 |
4.7 荧光定量验证RNA-seq结果 | 第45-47页 |
4.8 猪源IL-19 的多序列比对和进化树分析 | 第47-48页 |
4.9 SH0165和HPS1712感染 3D4/21 细胞后表达检测 | 第48-49页 |
4.10 IL-19 在H. parasuis感染过程中的功能研究 | 第49-51页 |
4.10.1 干扰IL-19 后细胞因子的检测 | 第49-50页 |
4.10.2 过表达IL-19 后细胞因子的检测 | 第50-51页 |
4.11 SH0165和HPS1712感染仔猪后IL-19 的检测 | 第51-53页 |
4.11.1 感染前仔猪H. parasuis抗体检测 | 第51-52页 |
4.11.2 仔猪感染后临床症状观察 | 第52页 |
4.11.3 SH0165和HPS1712感染仔猪血清IL-19 检测 | 第52-53页 |
5 讨论 | 第53-58页 |
5.1 SH0165和HPS1712的抗吞噬试验 | 第53页 |
5.2 SH0165和HPS1712感染 3D4/21 引起细胞因子的差异 | 第53-54页 |
5.3 RNA-seq的数据分析 | 第54-56页 |
5.4 IL-19 的功能验证 | 第56-58页 |
6 结论 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-67页 |
附表 | 第67-70页 |
致谢 | 第70页 |