棘白霉素脱酰酶基因工程菌的构建及应用研究
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 棘白霉素类化合物 | 第10-13页 |
| 1.1.1 耐药性真菌的蔓延 | 第10页 |
| 1.1.2 棘白霉素类药物 | 第10-13页 |
| 1.2 ECB脱酰酶 | 第13-15页 |
| 1.2.1 ECB脱酰酶来源 | 第13-14页 |
| 1.2.2 ECB脱酰酶的催化机理 | 第14-15页 |
| 1.2.3 ECB脱酰酶的应用 | 第15页 |
| 1.3 链霉菌表达系统简介 | 第15-16页 |
| 1.3.1 链霉菌分泌途径的研究 | 第15-16页 |
| 1.3.2 链霉菌启动子的研究 | 第16页 |
| 1.4 本课题的研究目的和内容 | 第16-18页 |
| 第二章 ECB脱酰酶基因工程菌的构建 | 第18-38页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第18页 |
| 2.2.2 培养基及实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.2.3 菌种保藏 | 第19页 |
| 2.2.4 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2.5 主要引物 | 第20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.3.1 ECB脱酰酶基因工程菌表达载体的构建 | 第20-23页 |
| 2.3.2 变铅青链霉菌原生质体的制备和转化 | 第23-24页 |
| 2.3.3 ECB脱酰酶基因工程菌的诱导表达 | 第24-27页 |
| 2.4 结果与分析 | 第27-37页 |
| 2.4.1 ECB脱酰酶表达基因的获取 | 第27-30页 |
| 2.4.2 ECB脱酰酶基因工程菌的构建 | 第30-32页 |
| 2.4.3 ECB脱酰酶的诱导表达 | 第32-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 链霉菌高效分泌型表达载体的优化 | 第38-53页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 菌株与载体 | 第38页 |
| 3.2.2 培养基和实验材料 | 第38页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.4 主要引物 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-45页 |
| 3.3.1 构建带有不同信号肽的表达载体 | 第39-42页 |
| 3.3.2 构建带有不同启动子的表达载体 | 第42-45页 |
| 3.3.3 工程菌的酶活性检测 | 第45页 |
| 3.3.4 诱导条件的优化 | 第45页 |
| 3.4 结果与分析 | 第45-52页 |
| 3.4.1 构建带有不同信号肽的表达载体 | 第45-47页 |
| 3.4.2 信号肽对ECB脱酰酶分泌表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.3 构建带有不同启动子的表达载体 | 第48-50页 |
| 3.4.4 启动子对ECB脱酰酶分泌表达的影响 | 第50-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 ECB脱酰酶的发酵中试及固定化研究 | 第53-63页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 菌株 | 第53页 |
| 4.2.2 培养基与实验材料 | 第53页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第53-54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.3.1 ECB脱酰酶的7L发酵培养 | 第54页 |
| 4.3.2 ECB脱酰酶的30L发酵培养 | 第54页 |
| 4.3.3 ECB脱酰酶的300L发酵培养 | 第54-55页 |
| 4.3.4 4L反应釜的转化体系 | 第55页 |
| 4.3.5 ECB脱酰酶的蛋白粗纯化 | 第55页 |
| 4.3.6 ECB脱酰酶的固定化研究 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-61页 |
| 4.4.1 ECB脱酰酶的发酵中试实验 | 第56-57页 |
| 4.4.2 4L反应釜的转化体系 | 第57-58页 |
| 4.4.3 ECB脱酰酶的蛋白粗纯化 | 第58-59页 |
| 4.4.4 ECB脱酰酶的固定化研究 | 第59-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-63页 |
| 第五章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 5.1 课题总结 | 第63-64页 |
| 5.2 课题展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
