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西瓜MAPK和MAPKK家族基因的鉴定、表达模式和功能分析

致谢第6-7页
摘要第7-9页
Abstract第9-11页
目录第12-16页
第一章 文献综述及研究背景第16-32页
    前言第16页
    1.1 植物细胞信号转导第16-17页
    1.2 MAPK级联途径的基本组成第17页
    1.3 植物MAPK的分类第17-19页
    1.4 MAPK级联反应的激发子第19-20页
        1.4.1 Hapin第19页
        1.4.2 鞭毛蛋白(Flagellin)第19-20页
    1.5 MAPK级联途径的信号传导机制第20-21页
        1.5.1 搭架过程第20-21页
        1.5.2 锚定反应第21页
    1.6 植物MAPK级联途径的功能第21-31页
        1.6.1 MAPK级联途径参与调控生物胁迫第21-22页
        1.6.2 MAPK级联途径参与调控非生物胁迫第22-24页
            1.6.2.1 MAPK级联途径在干旱胁迫中的功能第22页
            1.6.2.2 MAPK级联途径在盐胁迫中的功能第22-23页
            1.6.2.3 MAPK级联途径在温度胁迫中的功能第23页
            1.6.2.4 MAPK级联途径在机械损伤中的功能第23-24页
        1.6.3 MAPK级联途径在活性氧(ROS)信号传导中的功能第24页
        1.6.4 MAPK级联途径在Ca~(2+)信号传导中的功能第24-25页
        1.6.5 MAPK级联途径参与植物激素信号转导第25-27页
            1.6.5.1 MAPK级联途径在ABA信号传导中的功能第25-26页
            1.6.5.2 MAPK级联途径在乙烯信号传导中的功能第26页
            1.6.5.3 MAPK级联途径在生长素信号传导中的功能第26-27页
        1.6.6 MAPK级联途径调控植物生长发育第27-28页
            1.6.6.1 MAPK级联途径调控胞质分裂第27页
            1.6.6.2 MAPK级联途径调控气孔发育与运动第27-28页
            1.6.6.3 MAPK级联途径调控植物衰老过程第28页
        1.6.7 MAPK级联途径在植物免疫响应中的功能第28-31页
            1.6.7.1 MAPK级联反应参与PTI抗病反应第29-30页
            1.6.7.2 MAPK级联反应参与ETI抗病反应第30-31页
    1.7 本研究的目的意义及主要内容第31-32页
        1.7.1 研究的目的与意义第31页
        1.7.2 研究的主要内容第31-32页
第二章 材料与方法第32-40页
    2.1 试验材料第32-34页
        2.1.1 植物材料第32页
        2.1.2 植物材料处理第32页
        2.1.3 菌株和载体第32页
        2.1.4 酶及各种生化试剂第32页
        2.1.5 PCR引物(见附表)第32页
        2.1.6 生物信息学软件及网络资源第32-34页
    2.2 试验方法第34-40页
        2.2.1 MAPK、MAPKK家族基因的鉴定和命名第34页
        2.2.2 多重氨基酸序列比对、系统进化树构建及保守结构域分析第34页
        2.2.3 植物总RNA的提取第34-35页
        2.2.4 反转录合成cDNA第35页
        2.2.5 基因克隆的鉴定第35页
        2.2.6 荧光定量PCR表达分析第35-36页
        2.2.7 采集西瓜各组织样品第36页
        2.2.8 外源信号分子诱导处理第36页
        2.2.9 pGADT7-Rec、pGBKT7-Bait载体的构建第36页
        2.2.10 酵母共转化第36-37页
        2.2.11 GFP过表达载体的构建第37页
        2.2.12 本氏烟瞬时表达体系的构建第37-38页
        2.2.13 亚细胞定位第38页
        2.2.14 灰霉菌的培养及接种第38页
        2.2.15 病斑大小统计第38页
        2.2.16 菌量测定第38页
        2.2.17 台酚蓝染色、DAB和NBT染色第38-39页
        2.2.18 西瓜枯萎菌的培养及接种第39-40页
第三章 西瓜MAPK、MAPKK家族基因的鉴定、表达模式分析、蛋白互作及抗病功能研究第40-78页
    3.1 西瓜MAPK和MAPKK家族基因的鉴定和生物信息学分析第40-50页
        3.1.1 基因的克隆和鉴定第40-42页
        3.1.2 西瓜MAPK家族成员的序列分析第42-43页
        3.1.3 西瓜MAPK家族成员的系统进化树构建及保守结构域分析第43-46页
        3.1.4 西瓜MAPKK家族成员的序列分析第46-47页
        3.1.5 西瓜MAPKK家族成员的系统进化树构建及保守结构域分析第47-49页
        3.1.6 西瓜ClMPKs和ClMKKs在染色体上的分布第49-50页
    3.2 西瓜MAPK和MAPKK家族基因的表达模式分析第50-65页
        3.2.1 组织特异性表达分析第50-52页
        3.2.2 逆境胁迫下的表达分析第52-60页
            3.2.2.1 干旱胁迫下的表达第52-54页
            3.2.2.2 高盐胁迫下的表达第54-56页
            3.2.2.3 低温胁迫下的表达第56-58页
            3.2.2.4 高温胁迫下的表达第58-60页
        3.2.3 激素诱导下的表达分析第60-62页
        3.2.4 西瓜枯萎菌侵染后的表达分析第62-65页
    3.3 西瓜MAPK和MAPKK家族成员间的蛋白互作分析第65-67页
    3.4 西瓜MAPK和MAPKK家族蛋白的亚细胞定位第67-68页
    3.5 西瓜MAPK和MAPKK家族基因的抗病功能分析第68-78页
        3.5.1 ClMPK7瞬时表达引起过敏性反应第68-71页
        3.5.2 接种灰霉菌B.cinerea前ClMPKs/ClMKKs基因的表达量分析第71-72页
        3.5.3 接种灰霉菌B.cinerea后的病害表型及发病统计第72-75页
        3.5.4 5个ClMPKs/ClMKKs基因的抗病机理分析第75-78页
第四章 小结与讨论第78-82页
参考文献第82-98页
附表 本文引物序列第98-103页

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