| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1.1 血红素过氧化物酶 | 第16-19页 |
| 1.1.1 血红素过氧化物酶的概念 | 第16页 |
| 1.1.2 血红素过氧化物酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.3 血红素过氧化物酶的生理功能 | 第17-18页 |
| 1.1.4 血红素过氧化物酶的应用 | 第18-19页 |
| 1.2 染料脱色过氧化物酶研宄进展 | 第19-26页 |
| 1.2.1 DyP的发现历史 | 第19-20页 |
| 1.2.2 DyPs 的分类— | 第20-22页 |
| I.2.3 DyPs的晶体结构 | 第22-24页 |
| 1.2.4 DyPs的分子生物学研究 | 第24页 |
| 1.2.5 DyPs的生理作用 | 第24-25页 |
| 1.2.6 DyPs的潜在应用价值 | 第25-26页 |
| 1.3 木聚糖酶 | 第26-30页 |
| 1.3.1 木聚糖酶的概述 | 第26页 |
| 1.3.2 木聚糖酶的分类 | 第26-27页 |
| 1.3.3 木聚糖酶的性质 | 第27页 |
| 1.3.4 木聚糖酶的异源表达 | 第27-28页 |
| 1.3.5 木聚糖酶应用 | 第28-30页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第30-34页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第30页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第30-31页 |
| 1.4.3 研究的意义 | 第31页 |
| 1.4.4 技术路线 | 第31-34页 |
| 第二章 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶生物信息学分析 | 第34-48页 |
| 2.1 前言 | 第34页 |
| 2.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 2.2.1 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因和蛋白质序列分析 | 第34页 |
| 2.2.2 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因和蛋白质同源序列比对 | 第34页 |
| 2.2.3 绿色糖单孢菌与几种典型DyP蛋白序列同源性分析 | 第34-35页 |
| 2.2.4 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶的蛋白质结构分析 | 第35页 |
| 2.3 结果和分析 | 第35-46页 |
| 2.3.1 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因序列的基本信息 | 第35-36页 |
| 2.3.2 绿色糖单孢菌DyP的基因序列的BLASTN结果 | 第36-37页 |
| 2.3.3 SviDyP 蛋白序歹ij的 BLASTP 结果 | 第37-38页 |
| 2.3.4 绿色糖单孢菌的系统进化树分析 | 第38-40页 |
| 2.3.5 与其他菌种的DyP蛋白序列比对分析 | 第40-42页 |
| 2.3.6 SviDyP蛋白结构分析 | 第42-46页 |
| 2.4 小结 | 第46-48页 |
| 第三章 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因克隆、原核表达及酶学性质研宄 | 第48-70页 |
| 3.1 前言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第48-53页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第48-52页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第52-53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-58页 |
| 3.3.1 绿色糖单孢菌基因组DNA的提取 | 第53页 |
| 3.3.2 大肠杆菌质粒的提取 | 第53页 |
| 3.3.3 大肠杆菌感受态细胞的制作与转化 | 第53页 |
| 3.3.4 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因的克隆载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.5 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因的表达载体的构建 | 第54页 |
| 3.3.6 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶的诱导 | 第54-55页 |
| 3.3.7 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶的大量表达与纯化 | 第55页 |
| 3.3.8 SDS-PAGE分析蛋白质纯度及分子量 | 第55页 |
| 3.3.9 Western blot 分析42 | 第55页 |
| 3.3.10 蛋白质的浓度测定 | 第55-56页 |
| 3.3.11 重组SviDyP的光谱分析 | 第56页 |
| 3.3.12 染料脱色过氧化物酶的酶活测定 | 第56-57页 |
| 3.3.13 染料脱色过氧化物酶的酶学性质表征 | 第57-58页 |
| 3.4 结果与分析 | 第58-67页 |
| 3.4.1 绿色糖单孢菌svidyp的克隆 | 第58-60页 |
| 3.4.2 绿色糖单抱菌svidyp表达载体的构建及验证 | 第60-61页 |
| 3.4.3 SviDyP在大肠杆菌中的诱导表达 | 第61-63页 |
| 3.4.4 重组酶pET28a-SviDyP的大量表达与纯化 | 第63-64页 |
| 3.4.5 重组酶SviDyP的光谱分析 | 第64页 |
| 3.4.6 重组酶SviDyP的酶学性质 | 第64-67页 |
| 3.5 小结 | 第67-70页 |
| 第四章 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶在酵母中的表达 | 第70-80页 |
| 4.1 前言 | 第70页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第70-71页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第70页 |
| 4.2.2 试验仪器 | 第70-71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-75页 |
| 4.3.1 菌株 E. coli DH5o/pMDI9-T-5VK^p 质粒 DNA 的提取 | 第71页 |
| 4.3.2 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因克隆载体的构建 | 第71-72页 |
| 4.3.3 绿色糖单孢菌染料脱色过氧化物酶基因表达载体的构建 | 第72页 |
| 4.3.4 重组表达质粒pPICZoA-sv/办p的大量制备 | 第72页 |
| 4.3.5 质粒pPICZaA-sv/办p线性化与纯化 | 第72-73页 |
| 4.3.6 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第73页 |
| 4.3.7 毕赤酵母GS115的电击转化 | 第73页 |
| 4.3.8 重组毕赤酵母的平扳筛选 | 第73-74页 |
| 4.3.9 重组毕赤酵母工程菌株的小规模诱导表达 | 第74页 |
| 4.3.10 重组染料脱色过氧化物酶的纯化 | 第74页 |
| 4.3.11 重组染料脱色过氧化物酶的脱糖基化 | 第74页 |
| 4.3.12 SDS-PAGE分析蛋白质纯度及分子量 | 第74页 |
| 4.3.13 染料脱色过氧化物酶酶学性质的表征 | 第74-75页 |
| 4.4 结果与分析 | 第75-79页 |
| 4.4.1 毕赤酵母表达载体pPICZaA-SviDyP的构建 | 第75-77页 |
| 4.4.2 重组子pPICZaA-SviDyP的诱导表达 | 第77页 |
| 4.4.3 重组酶 pPICZaA-SviDyP 的纯化 | 第77-78页 |
| 4.4.4 重组酶pPICZaA-SviDyP的小规模诱导 | 第78页 |
| 4.4.5 重组酶pPICZaA-SviDyP的酶学性质 | 第78-79页 |
| 4.5 小结 | 第79-80页 |
| 第五章 SviXyNlOA在毕赤酵母中表达及重组酶酶学性质研宄 | 第80-96页 |
| 5.1 前言 | 第80页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第80-82页 |
| 5.2.1 试验材料 | 第80页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第80-82页 |
| 5.3 实验方法 | 第82-86页 |
| 5.3.1 菌株 E. coli BL21 (DE3)/pET28a-svzxyn7OA 质粒的提取 | 第82页 |
| 5.3.2 PCR扩增用于蛋白表达的绿色糖单孢菌木聚糖酶基因 | 第82页 |
| 5.3.3 绿色糖单孢菌木聚糖酶基因克隆载体的构建 | 第82页 |
| 5.3.4 绿色糖单孢菌木聚糖酶基因表达载体的构建 | 第82页 |
| 5.3.5 重组质粒的筛选、验证 | 第82页 |
| 5.3.6 重组表达质粒pPlC9-^v/jqy?7似的大量制备 | 第82页 |
| 5.3.7 质粒pPIC9-sWxj?/(M线性化与纯化 | 第82-83页 |
| 5.3.8 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第83页 |
| 5.3.9 毕赤酵母GS115的电击转化 | 第83页 |
| 5.3.10 重组毕赤酵母的平板筛选和甲醇表型鉴定 | 第83页 |
| 5.3.11 重组木聚糖酶的小规模诱导制备 | 第83-84页 |
| 5.3.12 重组木聚糖酶的纯化 | 第84页 |
| 5.3.13 重组木聚糖酶的脱糖基化 | 第84页 |
| 5.3.14 SDS-PAGE分析蛋白质纯度及分子量 | 第84页 |
| 5.3.15 木聚糖酶酶活性的测定 | 第84-85页 |
| 5.3.16 木聚糖酶的酶学性质的表征 | 第85-86页 |
| 5.4 结果与分析 | 第86-94页 |
| 5.4.1 绿色糖单孢菌的克隆 | 第86页 |
| 5.4.2 绿色糖单孢菌克隆载体的构建 | 第86页 |
| 5.4.3 绿色糖单孢菌克隆载体的验证 | 第86-88页 |
| 5.4.4 绿色糖单孢菌svixynWA真核表达载体的构建及验证 | 第88-89页 |
| 5.4.5 绿色糖单孢菌木聚糖酶在毕赤酵母中的诱导表达 | 第89-90页 |
| 5.4.6 重组木聚糖酶的纯化 | 第90页 |
| 5.4.7 木糖标准曲线的绘制 | 第90-91页 |
| 5.4.8 重组木聚糖酶的酶学特征分析 | 第91-94页 |
| 5.5 小结 | 第94-96页 |
| 第六章 酶制剂漂白桉木硫酸盐浆的效果研宄 | 第96-114页 |
| 6.1 前言 | 第96页 |
| 6.2 实验材料和仪器 | 第96-98页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第96-98页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第98页 |
| 6.3 实验方法 | 第98-100页 |
| 6.3.1 各种酶制剂的制备方法 | 第98页 |
| 6.3.2 酶制剂预漂白纸浆的最佳条件摸索 | 第98页 |
| 6.3.3 SviDyP酶制剂预漂白纸浆 | 第98-99页 |
| 6.3.4 SviXyNlOA酶制剂预漂白纸浆 | 第99页 |
| 6.3.5 商品木聚糖酶预漂白纸浆 | 第99页 |
| 6.3.6 商品锰过氧化物酶预漂白纸浆 | 第99页 |
| 6.3.7 复合酶预处理纸浆 | 第99页 |
| 6.3.8 后续漂白 | 第99页 |
| 6.3.9 浆料分析检测 | 第99-100页 |
| 6.4 结果与分析 | 第100-112页 |
| 6.4.1 染料脱色过氧化物酶预漂白效果 | 第100-102页 |
| 6.4.2 木聚糖酶预漂白效果 | 第102-104页 |
| 6.4.3 木聚糖酶与商品木聚糖酶漂白效果比较 | 第104-105页 |
| 6.4.4 染料脱色过氧化物?与锰过氧化物酶漂白效果比较 | 第105页 |
| 6.4.5 木聚糖酶与染料脱色过氧化物酶复合_漂白效果 | 第105-106页 |
| 6.4.6 酶制剂预处理对后续漂白的影响 | 第106-108页 |
| 6.4.7 电镜扫描观测纸浆表面纤维形态 | 第108-112页 |
| 6.5 小结 | 第112-114页 |
| 第七章 全文总结及创新点 | 第114-118页 |
| 7.1 全文总结 | 第114-115页 |
| 7.2 本文主要创新点 | 第115-116页 |
| 7.3 对以后工作的展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-128页 |
| 英文缩写表 | 第128-129页 |
| 个人简介 | 第129-130页 |
| 导师简介 | 第130-132页 |
| 博士在读期间发表论文 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
