| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文缩略词 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 马铃薯甲虫概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 马铃薯甲虫 | 第14-15页 |
| 1.1.2 马铃薯甲虫的防治 | 第15页 |
| 1.1.3 马铃薯甲虫的抗药性产生的机理研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 RNA干扰与作用机制 | 第16-21页 |
| 1.2.1 RNA干扰的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 RNA干扰简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2.1 RNA干扰的应用前景 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 RNA干扰的作用机制 | 第18页 |
| 1.2.3 马铃薯甲虫RNA干扰技术的研究方法 | 第18-21页 |
| 1.2.3.1 dsRNA的合成 | 第18-19页 |
| 1.2.3.2 利用大肠杆菌表达ds RNA | 第19页 |
| 1.2.3.3 昆虫RNA干扰的导入方法 | 第19-21页 |
| (1) 注射法 | 第19-20页 |
| (2) 饲喂法 | 第20页 |
| (3) 组织培养法 | 第20-21页 |
| 1.2.4 系统性干扰的概念 | 第21页 |
| 1.3 RNA干扰元件基因 | 第21-23页 |
| 1.3.1 Sid-1 | 第22页 |
| 1.3.2 Dicer 2 | 第22-23页 |
| 1.3.3 Argonaute 2 | 第23页 |
| 1.4 vATPase简介 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的立题背景及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 马铃薯甲虫RNA干扰核心元件基因的克隆 | 第26-36页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-32页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.3 马铃薯甲虫两个Sid-1 cDNA的获取 | 第27页 |
| 2.1.4 马铃薯甲虫总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.1.5 c DNA第一链的合成 | 第28页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第28-30页 |
| 2.1.7 PCR反应体系及条件 | 第30页 |
| 2.1.8 PCR产物的回收与纯化 | 第30-31页 |
| 2.1.9 连接和转化实验 | 第31页 |
| 2.1.10 测序分析 | 第31页 |
| 2.1.11 基因组结构分析、序列比对和系统发育分析 | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.2.1 马铃薯甲虫Sid-1基因序列基因组结构分析 | 第32-33页 |
| 2.2.2 马铃薯甲虫Sid-1的多重序列比对和系统发育分析 | 第33-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 RNA干扰元件基因组织龄期表达分析 | 第36-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-37页 |
| 3.1.1 qPCR引物设计 | 第36页 |
| 3.1.2 模板材料来源 | 第36页 |
| 3.1.3 马铃薯甲虫总RNA的提取 | 第36页 |
| 3.1.4 cDNA的合成 | 第36-37页 |
| 3.1.5 实时荧光定量PCR | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 3.2.1 LdSid-1a和LdSid-1c的组织龄期表达 | 第37-40页 |
| 3.2.2 LdDicer2a和LdDicer2b的组织龄期表达 | 第40-41页 |
| 3.2.3 LdAgo2a和LdAgo2b的组织龄期表达 | 第41-43页 |
| 3.3 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 马铃薯甲虫RNA干扰元件基因对RNA干扰过程的影响 | 第45-64页 |
| 4.1 材料与方法 | 第45-49页 |
| 4.1.1 供试昆虫 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 4.1.3 大肠杆菌发酵生产dsRNA | 第45-49页 |
| 4.1.3.1 引物设计 | 第45-46页 |
| 4.1.3.2 用于构建载体片段的克隆 | 第46页 |
| 4.1.3.3 PCR产物的回收与纯化 | 第46页 |
| 4.1.3.4 连接和转化实验 | 第46页 |
| 4.1.3.5 转化及单克隆的挑选 | 第46页 |
| 4.1.3.6 测序分析 | 第46页 |
| 4.1.3.7 质粒的提取和酶切检测 | 第46-47页 |
| 4.1.3.8 dsRNA表达载体的连接反应 | 第47-48页 |
| 4.1.3.9 转化反应和细菌培养 | 第48页 |
| 4.1.3.10 载体表达dsRNA验证 | 第48-49页 |
| 4.1.4 dsRNA的喂食干扰实验 | 第49页 |
| 4.2 结果与分析 | 第49-61页 |
| 4.2.1 马铃薯甲虫RNA干扰相关元件基因ds RNA载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.2 敲低RNA干扰元件基因对RNA干扰过程的影响 | 第50-51页 |
| 4.2.3 dsATPaseE的致死终浓度LC50 | 第51页 |
| 4.2.4 RNA干扰元件基因表达调低对马铃薯甲虫幼虫的影响 | 第51-53页 |
| 4.2.5 预处理RNA干扰核心元件的dsRNA对喂食dsATPaseE幼虫表型的影响 | 第53-55页 |
| 4.2.5.1 预处理对喂食稀释10倍dsATPaseE菌液的幼虫表型的影响 | 第53页 |
| 4.2.5.2 预处理对喂食稀释100倍dsATPaseE菌液的幼虫表型的影响 | 第53-54页 |
| 4.2.5.3 预处理对喂食稀释1000倍dsATPaseE菌液的幼虫表型的影响 | 第54-55页 |
| 4.2.6 预处理RNA干扰核心元件的dsRNA对喂食dsATPaseE幼虫靶标基因表达的影响 | 第55-61页 |
| 4.2.6.1 预处理RNA干扰核心元件的dsRNA对喂食稀释10倍dsATPaseE幼虫靶标基因表达的影响 | 第55-58页 |
| 4.2.6.2 预处理RNA干扰核心元件的dsRNA对喂食稀释100倍dsATPaseE幼虫靶标基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.2.6.3 预处理RNA干扰核心元件的dsRNA对喂食稀释1000倍dsATPaseE幼虫靶标基因表达的影响 | 第59-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的相关学术论文 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间参加的学术会议 | 第72-73页 |
| 导师评阅表 | 第73页 |
