| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略语表（Abbreviations） | 第14-15页 |
| 1. 前言 | 第15-25页 |
| 1.1. 课题的提出 | 第15-17页 |
| 1.2. 前人研究进展 | 第17-24页 |
| 1.2.1. 类胡萝卜素与柑橘色泽 | 第17-19页 |
| 1.2.2. 柑橘各类色泽突变体的发现与代谢机理研究 | 第19-20页 |
| 1.2.3. 类胡萝卜素与质体发育 | 第20-21页 |
| 1.2.4. 花椰菜色泽突变体的发现与Or基因功能研究 | 第21-23页 |
| 1.2.5. 其他物种中Or基因功能的研究 | 第23-24页 |
| 1.3. 本研究的目的与主要内容 | 第24-25页 |
| 2. 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1. 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1. 柑橘果肉材料 | 第25-26页 |
| 2.1.2. 柑橘胚性愈伤组织材料 | 第26-27页 |
| 2.1.3. 拟南芥野生型与转Or基因型种子 | 第27页 |
| 2.1.4. 载体和感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.1.5. 实验仪器、试剂与耗材 | 第28-29页 |
| 2.2. 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1. 柑橘胚性愈伤组织DNA提取 | 第29页 |
| 2.2.2. 柑橘RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1. 柑橘果肉RNA的粗提与纯化（异硫氰酸胍法） | 第29-30页 |
| 2.2.2.2. 柑橘胚性愈伤组织RNA提取 | 第30页 |
| 2.2.3. 柑橘RNA的反转录（Ta KaRa试剂盒） | 第30-31页 |
| 2.2.4. 实时定量荧光PCR（qRT PCR） | 第31页 |
| 2.2.4.1. 同源序列分析与qRT PCR引物的设计、检测 | 第31页 |
| 2.2.4.2. qRT PCR | 第31页 |
| 2.2.5. 柑橘Or基因超量表达载体构建 | 第31-34页 |
| 2.2.5.1. PCR重组克隆与片段回收 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2. BP重组反应 | 第32页 |
| 2.2.5.3. 热激转化大肠杆菌感受态菌株（E.coil DH5α） | 第32-33页 |
| 2.2.5.4. 大肠杆菌感受态菌株（E.coil DH5α）阳性克隆的验证及测序 | 第33页 |
| 2.2.5.5. 测序结果的核对与质粒的提取 | 第33页 |
| 2.2.5.6. LR重组反应与终载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.6. 根癌农杆菌侵染菌株的制备与柑橘胚性愈伤组织的遗传转化 | 第34-35页 |
| 2.2.6.1. 热激转化根癌农杆菌感受态菌株（eha105） | 第34页 |
| 2.2.6.2. 根癌农杆菌感受态菌株（eha105）阳性克隆的验证与菌液保存 | 第34-35页 |
| 2.2.6.3. 柑橘胚性愈伤组织的准备 | 第35页 |
| 2.2.6.4. 农杆菌侵染液的制备 | 第35页 |
| 2.2.6.5. 侵染、共培养及筛选培养 | 第35页 |
| 2.2.7. 抗性愈伤组织后期筛选与阳性鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.8. 细胞学分析 | 第37-39页 |
| 2.2.8.1. 柑橘胚性愈伤组织原生质体分离与观察分析 | 第37-38页 |
| 2.2.8.2. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系的饥饿处理与TEM观察 | 第38页 |
| 2.2.8.3. 拟南芥种子的愈伤诱导与TEM观察 | 第38页 |
| 2.2.8.4. 琯溪蜜柚色泽突变体果肉汁胞TEM观察 | 第38-39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-69页 |
| 3.1. 琯溪蜜柚色泽突变体成熟果肉汁胞有色体电镜分析 | 第39-40页 |
| 3.2. 拟南芥野生型与转Or基因型种子的愈伤诱导与电镜分析 | 第40-42页 |
| 3.3. 柑橘各类色泽突变体中Or基因与质体基因组基因的表达分析 | 第42-54页 |
| 3.3.1. 柑橘Or基因的确定 | 第42-43页 |
| 3.3.2. 柑橘各类色泽突变体的RNA提取与反转录 | 第43-44页 |
| 3.3.3. qRT PCR引物质量检测 | 第44-45页 |
| 3.3.4. 柑橘各类色泽突变体中Or基因表达分析（数据详见附录V） | 第45-48页 |
| 3.3.4.1. 琯溪蜜柚色泽突变体成熟果肉中Or基因表达分析 | 第45-46页 |
| 3.3.4.2. 暗柳橙与红暗柳橙发育时期果肉中Or基因表达分析 | 第46-48页 |
| 3.3.5. 柑橘质体基因组基因表达分析（数据详见附录V） | 第48-54页 |
| 3.3.5.1. 琯溪蜜柚色泽突变体成熟果肉细胞质体基因组基因表达分析 | 第48-51页 |
| 3.3.5.2. 暗柳橙与红暗柳橙发育时期果肉细胞质体基因组基因表达分析 | 第51-54页 |
| 3.4. 柑橘Or基因遗传转化 | 第54-69页 |
| 3.4.1. 柑橘Or基因的克隆与超量表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.4.2. 柑橘Or基因超量表达载体的农杆菌转化 | 第56页 |
| 3.4.3. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织的获得 | 第56-58页 |
| 3.4.4. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系的挑选与培养 | 第58-60页 |
| 3.4.5. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系的鉴定与分析 | 第60-69页 |
| 3.4.5.1. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系的阳性鉴定 | 第60页 |
| 3.4.5.2. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系的RNA提取与反转录 | 第60-61页 |
| 3.4.5.3. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系相关基因表达分析(数据见附录V) | 第61-63页 |
| 3.4.5.4. 柑橘转Or基因抗性愈伤组织单系的细胞学观察 | 第63-69页 |
| 4. 讨论 | 第69-73页 |
| 4.1. 柑橘各类色泽突变体中色泽表型、Or基因表达量及有色体数量三者之间的关系 | 第69-70页 |
| 4.2. 柑橘质体基因组基因表达的规律性、多样性与特异性探讨 | 第70-71页 |
| 4.3. 柑橘遗传转化超量表达载体的构建方法比较 | 第71页 |
| 4.4. 柑橘转Or基因Cs7g18870 抗性愈伤组织单系呈色原因分析 | 第71-72页 |
| 4.5. 柑橘Or基因Cs7g18870 亚细胞定位探讨 | 第72页 |
| 4.6. 抗性愈伤组织单系细胞内质体发育状况与Or基因功能浅析 | 第72-73页 |
| 5. 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 附录I 实验主要试剂的配制 | 第79-80页 |
| 附录II 花椰菜、柑橘Or基因序列 | 第80-82页 |
| 附录III Or基因与83对质体基因组基因qRT PCR引物 | 第82-88页 |
| 附录IV 各类PCR体系与程序 | 第88-90页 |
| 附录V qRT PCR数据处理结果 | 第90-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
