| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 基因工程产品生产 | 第13-14页 |
| 1.2 发酵中宿主细胞的选择 | 第14-17页 |
| 1.2.1 大肠杆菌 | 第14-15页 |
| 1.2.2 酵母 | 第15-16页 |
| 1.2.3 高等动物 | 第16-17页 |
| 1.2.4 高等植物 | 第17页 |
| 1.3 大肠杆菌高密度发酵中溶氧的问题 | 第17-18页 |
| 1.4 透明颤菌血红蛋白 | 第18-21页 |
| 1.4.1 透明颤菌血红蛋白 | 第18-19页 |
| 1.4.2 VHb的结构与特征 | 第19-20页 |
| 1.4.3 VHb的表达 | 第20-21页 |
| 1.5 VHb在生产中的应用 | 第21页 |
| 1.6 自组织化 | 第21-22页 |
| 1.7 本文研究内容和意义 | 第22页 |
| 1.8 本课题研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 自组织化VHb基因的构建及蛋白表达分析 | 第23-40页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.2.1 菌种及质粒 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第24页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2.4 培养基及相关溶液 | 第25-26页 |
| 2.2.5 引物 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.3.1 自组织化VHb基因构建 | 第27-30页 |
| 2.3.2 VHb及其自组织化蛋白的比较分析 | 第30-33页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第33-39页 |
| 2.4.1 PCR产物电泳 | 第33页 |
| 2.4.2 重组质粒的验证 | 第33页 |
| 2.4.3 蛋白纯化 | 第33-35页 |
| 2.4.4 蛋白结构和功能 | 第35-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 自组织化VHb对GFPuv表达的影响 | 第40-53页 |
| 3.1 引言 | 第40-41页 |
| 3.2 实验器材及试剂 | 第41页 |
| 3.2.1 菌种及质粒 | 第41页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第41页 |
| 3.2.3 实验设备 | 第41页 |
| 3.2.4 培养基及相关溶液 | 第41页 |
| 3.2.5 PCR引物 | 第41页 |
| 3.3 实验设计 | 第41-45页 |
| 3.3.1 共表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.3.2 自组化VHb对大肠杆菌生长及蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3 自组化VHb对宿主细胞氧调节能力的影响 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 3.4.1 重组载体的验证 | 第45页 |
| 3.4.2 重组菌生长差异的比较 | 第45-46页 |
| 3.4.3 重组菌胞内荧光强度差异的比较 | 第46-47页 |
| 3.4.4 紫外可见吸收光谱 | 第47-48页 |
| 3.4.5 电泳分析 | 第48-49页 |
| 3.4.6 荧光猝灭 | 第49页 |
| 3.4.7 抗过氧化氢能力 | 第49-51页 |
| 3.4.8 氧上传递 | 第51页 |
| 3.4.9 溶氧量 | 第51-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 自组织化VHb对rh ARG表达的影响 | 第53-70页 |
| 4.1 引言 | 第53-54页 |
| 4.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.2.1 菌种及质粒 | 第54页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第54页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第54-55页 |
| 4.2.4 培养基及相关溶液的配制 | 第55页 |
| 4.2.5 PCR引物 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.3.1 精氨酸酶与辅助蛋白共表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 4.3.2 精氨酸酶活性的检测 | 第56-57页 |
| 4.3.3 不同试剂对大肠杆菌的透化作用 | 第57页 |
| 4.3.4 碳源、氮源对宿主表达rhARG的影响 | 第57页 |
| 4.3.5 卟啉蛋白在不同溶氧条件下对宿主细胞的影响 | 第57-58页 |
| 4.3.6 5L发酵罐中的宿主行为 | 第58页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第58-68页 |
| 4.4.1 载体构建的验证 | 第58页 |
| 4.4.2 透化方法的探究 | 第58-63页 |
| 4.4.3 不同碳、氮因子对宿主细胞的影响 | 第63-66页 |
| 4.4.4 不同溶氧溶氧条件的影响 | 第66-68页 |
| 4.4.5 发酵结果 | 第68页 |
| 4.5 小结 | 第68-70页 |
| 第五章 呼吸链末端氧化酶基因敲除 | 第70-79页 |
| 5.1 引言 | 第70页 |
| 5.2 实验器材及试剂 | 第70-72页 |
| 5.2.1 菌种及质粒 | 第70页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第70-71页 |
| 5.2.3 实验设备 | 第71页 |
| 5.2.4 培养基及相关溶液 | 第71页 |
| 5.2.5 引物 | 第71-72页 |
| 5.3 实验设计 | 第72-74页 |
| 5.3.1 同源重组片段的克隆 | 第72页 |
| 5.3.2 目标基因的敲除 | 第72-74页 |
| 5.3.3 基因敲除菌生长行为 | 第74页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第74-78页 |
| 5.4.1 PCR验证电泳结果 | 第74-75页 |
| 5.4.2 基因缺陷型菌生长曲线研究 | 第75-78页 |
| 5.5 小结 | 第78-79页 |
| 第六章 总结 | 第79-80页 |
| 存在的问题与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第92-93页 |
| 后记 | 第93-94页 |
| 附件 | 第94-98页 |
