| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 油菜概论 | 第13页 |
| 1.2 植物角质层蜡质研究现状 | 第13-18页 |
| 1.2.1 植物角质层蜡质的组成及结构 | 第13-15页 |
| 1.2.2 植物蜡质功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 植物蜡质的合成途径 | 第16-17页 |
| 1.2.4 蜡质基因的研究 | 第17-18页 |
| 1.3 细胞色素P450与中链烷烃羟化酶（MAH1）及其研究进展 | 第18-23页 |
| 1.3.1 植物细胞色素P450 | 第18-20页 |
| 1.3.2 中链烷烃羟化酶（MAH1） | 第20页 |
| 1.3.3 MAH1参与次级醇和酮的生成 | 第20-23页 |
| 第二章 引言 | 第23-25页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2.2 研究的主要内容 | 第23-25页 |
| 第三章 材料与方法 | 第25-39页 |
| 3.1 甘蓝型油菜MAH1基因的克隆 | 第25-30页 |
| 3.1.1 试验材料和试剂 | 第25页 |
| 3.1.2 主要试验仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 样品gDNA、总RNA的提取和cDNA的合成 | 第25-27页 |
| 3.1.4 BnMAH1-1 和Bn MAH1-2 基因的扩增 | 第27-28页 |
| 3.1.5 目的片段的回收 | 第28页 |
| 3.1.6 目的片段与pMD-19T载体连接 | 第28-29页 |
| 3.1.7 转化大肠杆菌 | 第29-30页 |
| 3.2 基因表达分析 | 第30-31页 |
| 3.2.1 试验材料和试剂 | 第30页 |
| 3.2.2 试验仪器 | 第30页 |
| 3.2.3 油菜BnMAH1基因转录水平实时荧光定量PCR检测 | 第30页 |
| 3.2.4 激素诱导后油菜BnMAH1基因转录水平实时荧光定量PCR检测 | 第30-31页 |
| 3.3 Bn MAH1-1 超表达载体构建 | 第31-34页 |
| 3.3.1 主要试验试剂 | 第31页 |
| 3.3.2 试验仪器 | 第31-32页 |
| 3.3.3 载体pCambia2301G质粒提取 | 第32页 |
| 3.3.4 pCambia2301G载体和目的基因片段的双酶切 | 第32-33页 |
| 3.3.5 目的片段与载体连接 | 第33页 |
| 3.3.6 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第33-34页 |
| 3.4 BnMAH1-1 的RNAi载体构建 | 第34-36页 |
| 3.4.1 实验材料和试剂 | 第34页 |
| 3.4.2 试验仪器 | 第34页 |
| 3.4.3 干扰片段的克隆 | 第34-35页 |
| 3.4.4 pFGC5941M载体骨架制备和反义片段的插入 | 第35页 |
| 3.4.5 中间载体的酶切和正义片段的插入 | 第35-36页 |
| 3.4.6 RNAi载体转化根癌农杆菌 | 第36页 |
| 3.5 BnMAH1-1 超表达载体的遗传转化 | 第36-39页 |
| 3.5.1 发无菌苗 | 第36页 |
| 3.5.2 预培养 | 第36页 |
| 3.5.3 侵染与共培养 | 第36-37页 |
| 3.5.4 杀农杆菌与诱导杭性愈伤 | 第37页 |
| 3.5.5 分化培养 | 第37页 |
| 3.5.6 分化茎 | 第37页 |
| 3.5.7 长茎 | 第37-38页 |
| 3.5.8 生根 | 第38页 |
| 3.5.9 驯化及移栽 | 第38-39页 |
| 第四章 结果与分析 | 第39-59页 |
| 4.1 甘蓝型油菜基因组DNA、总RNA的提取与cDNA合成 | 第39页 |
| 4.2 甘蓝型油菜BnMAH1-1 与BnMAH1-2 基因全长编码区的克隆 | 第39-40页 |
| 4.3 BnMAH1-1 和BnMAH1-2 基因的核苷酸水平分析 | 第40-44页 |
| 4.4 BnMAH1-1 和BnMAH1-2 的氨基酸水平分析 | 第44-50页 |
| 4.5 BnMAH1-1 与BnMAH1-2 在甘蓝型油菜中的组织器官特异性表达特征 | 第50页 |
| 4.6 BnMAH1基因家族成员在有蜡粉与无蜡粉材料中的差异表达 | 第50-51页 |
| 4.7 BnMAH1基因家族在甘蓝型油菜中激素诱导表达特征 | 第51-52页 |
| 4.8 BnMAH1-1 超表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.9 BnMAH1-1RNAi载体的构建 | 第53-57页 |
| 4.9.1 干扰片段的克隆 | 第53-54页 |
| 4.9.2 反义片段的插入-中间载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.9.3 正义片段的插入-RNA干扰载体的获得 | 第55-57页 |
| 4.10 BnMAH1-1 超表达载体转化甘蓝型油菜 | 第57-58页 |
| 4.11 转基因再生植株的分子检测 | 第58-59页 |
| 第五章 讨论与结论 | 第59-65页 |
| 5.1 讨论 | 第59-62页 |
| 5.1.1 甘蓝型油菜MAH1基因的克隆与生物信息学分析 | 第59页 |
| 5.1.2 甘蓝型油菜MAH1基因的表达特征及与蜡质合成的关系 | 第59-60页 |
| 5.1.3 基因编辑技术 | 第60-62页 |
| 5.2 结论 | 第62-65页 |
| 5.2.1 克隆了BnMAH1-1 与BnMAH1-2 的全长ORF序列 | 第62页 |
| 5.2.2 明确了BnMAH1-1 与BnMAH1-2 的转录表达特征 | 第62-63页 |
| 5.2.3 构建了BnMAH1-1 超表达载体和RNAi载体 | 第63页 |
| 5.2.4 遗传转化初步获得BnMAH1-1 基因的超表达再生植株 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第75页 |
