Bre通过增强p53蛋白的泛素化降解促进成骨分化
| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 中英文缩写词表 | 第5-11页 |
| 第一部分 前言 | 第11-39页 |
| 1.1 干细胞 | 第11-16页 |
| 1.1.1 干细胞的发展简介 | 第11页 |
| 1.1.2 干细胞的定义 | 第11页 |
| 1.1.3 干细胞的分类 | 第11-14页 |
| 1.1.4 干细胞的特性 | 第14-15页 |
| 1.1.5 干细胞研究的现状 | 第15-16页 |
| 1.2 骨 | 第16-29页 |
| 1.2.1 骨和骨组织简介 | 第16-19页 |
| 1.2.2 骨的发育 | 第19-21页 |
| 1.2.3 骨的重建 | 第21-22页 |
| 1.2.4 成骨分化调控 | 第22-27页 |
| 1.2.5 骨疾病 | 第27-29页 |
| 1.3 p53与骨发育 | 第29-33页 |
| 1.3.1 p53简介 | 第29-32页 |
| 1.3.2 p53的泛素化降解 | 第32页 |
| 1.3.3 p53与骨发育 | 第32-33页 |
| 1.4 Bre简介 | 第33-37页 |
| 1.4.1 Bre的表达及组织分布 | 第33-34页 |
| 1.4.2 Bre在细胞中的定位 | 第34页 |
| 1.4.3 Bre与细胞凋亡 | 第34-35页 |
| 1.4.4 Bre与DNA损伤修复 | 第35页 |
| 1.4.5 Bre与肿瘤 | 第35-36页 |
| 1.4.6 Bre与细胞分化 | 第36-37页 |
| 1.5 科学问题与研究目的 | 第37-38页 |
| 1.6 技术路线 | 第38-39页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第39-74页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-53页 |
| 2.1.1 常用仪器设备 | 第39-40页 |
| 2.1.2 常用实验耗材 | 第40-41页 |
| 2.1.3 商品化试剂 | 第41-42页 |
| 2.1.4 基因克隆引物 | 第42-43页 |
| 2.1.5 Real-time PCR引物 | 第43-46页 |
| 2.1.6 siRNA序列 | 第46-48页 |
| 2.1.7 抗体信息 | 第48-49页 |
| 2.1.8 细胞和细菌 | 第49-50页 |
| 2.1.9 实验动物 | 第50页 |
| 2.1.10 基因型鉴定引物 | 第50-51页 |
| 2.1.11 实验常用试剂配制 | 第51-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-74页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第53页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第53页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第53-54页 |
| 2.2.4 原代脂肪干细胞培养 | 第54-55页 |
| 2.2.5 脂肪干细胞表面标志鉴定 | 第55页 |
| 2.2.6 成骨分化诱导 | 第55页 |
| 2.2.7 成脂分化诱导 | 第55-56页 |
| 2.2.8 碱性磷酸酶染色 | 第56页 |
| 2.2.9 茜素红染色 | 第56-57页 |
| 2.2.10 油红O染色 | 第57页 |
| 2.2.11 细胞总RNA提取 | 第57页 |
| 2.2.12 组织总RNA提取 | 第57-58页 |
| 2.2.13 反转录 | 第58页 |
| 2.2.14 荧光定量PCR扩增 | 第58-59页 |
| 2.2.15 细胞总蛋白提取 | 第59页 |
| 2.2.16 蛋白浓度测定 | 第59-60页 |
| 2.2.17 SDS-PAGE胶配制 | 第60-61页 |
| 2.2.18 Western-blot | 第61-62页 |
| 2.2.19 免疫荧光 | 第62-63页 |
| 2.2.20 慢病毒感染 | 第63-64页 |
| 2.2.21 细胞周期检测 | 第64页 |
| 2.2.22 细胞增殖检测 | 第64页 |
| 2.2.23 裸鼠皮下异位成骨实验 | 第64-65页 |
| 2.2.24 H&E染色 | 第65页 |
| 2.2.25 Masson染色 | 第65-66页 |
| 2.2.26 免疫组化 | 第66-67页 |
| 2.2.27 卵巢切除模型 | 第67页 |
| 2.2.28 microCT检测 | 第67页 |
| 2.2.29 siRNA转染 | 第67-68页 |
| 2.2.30 质粒提取 | 第68页 |
| 2.2.31 基因克隆 | 第68-70页 |
| 2.2.32 基因定点突变 | 第70页 |
| 2.2.33 质粒转染 | 第70-71页 |
| 2.2.34 免疫共沉淀 | 第71-72页 |
| 2.2.35 双荧光素酶检测 | 第72页 |
| 2.2.36 小鼠鼠尾基因组提取 | 第72页 |
| 2.2.37 数据处理与分析 | 第72-74页 |
| 第三部分 实验结果 | 第74-115页 |
| 3.1 Bre的组织分布 | 第74-76页 |
| 3.2 Bre蛋白的亚细胞分布 | 第76-78页 |
| 3.3 Bre与干细胞成骨分化 | 第78-81页 |
| 3.4 Bre与骨质疏松 | 第81-84页 |
| 3.5 沉默Bre基因表达抑制成骨分化 | 第84-86页 |
| 3.6 过表达Bre基因促进成骨分化 | 第86-90页 |
| 3.7 Bre抑制成脂分化 | 第90页 |
| 3.8 Bre参与mbMSCs的体内成骨分化 | 第90-94页 |
| 3.9 Bre影响细胞周期和增殖 | 第94-98页 |
| 3.10 Bre参与p53信号通路的调控 | 第98-100页 |
| 3.11 Bre通过p53参与成骨分化调控 | 第100-103页 |
| 3.12 Bre促进p53蛋白的泛素化降解 | 第103-104页 |
| 3.13 Bre受到雌激素的调控 | 第104-106页 |
| 3.14 Nur77参与Bre基因的转录调控 | 第106-109页 |
| 3.15 构建Bre基因敲除小鼠 | 第109-112页 |
| 3.16 Bre基因敲除小鼠表型分析 | 第112-115页 |
| 第四部分 总结与展望 | 第115-120页 |
| 4.1 总结与讨论 | 第115-118页 |
| 4.2 创新 | 第118-119页 |
| 4.3 展望 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-131页 |
| 博士期间研究成果 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
