中文摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
第一章 引言 | 第11-15页 |
第二章 玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚中细胞凋亡的影响 | 第15-31页 |
1. 材料 | 第15-20页 |
1.1 试剂和仪器 | 第15-18页 |
1.2 溶液配制 | 第18-20页 |
2. 方法 | 第20-23页 |
2.1 卵母细胞的采集和体外成熟 | 第20页 |
2.2 卵母细胞的孤雌激活和体外培养 | 第20页 |
2.3 囊胚的玻璃化冷冻和解冻 | 第20-21页 |
2.4 线粒体膜电位(ΔΨm)的JC-1 检测 | 第21页 |
2.5 TUNEL凋亡染色 | 第21页 |
2.6 Caspase染色 | 第21-22页 |
2.7 凋亡相关基因的表达检测 | 第22-23页 |
2.8 数据分析 | 第23页 |
3. 结果 | 第23-28页 |
3.1 冷冻对猪孤雌激活囊胚体外发育的影响 | 第23-24页 |
3.2 冷冻对猪孤雌激活囊胚线粒体功能和凋亡水平的影响 | 第24-26页 |
3.3 冷冻对猪孤雌激活囊胚多种Caspase活性的影响 | 第26-27页 |
3.4 冷冻对猪孤雌激活囊胚不同凋亡途径中相关功能基因表达的影响 | 第27-28页 |
4. 讨论 | 第28-31页 |
第三章 白藜芦醇(RES)处理对猪孤雌激活囊胚抗冻能力的影响 | 第31-41页 |
1. 材料 | 第31-32页 |
1.1 试剂和仪器 | 第31-32页 |
2. 方法 | 第32页 |
2.1 卵母细胞的采集和体外成熟 | 第32页 |
2.2 卵母细胞的孤雌激活和体外培养 | 第32页 |
2.3 囊胚的玻璃化冷冻和解冻 | 第32页 |
2.4 线粒体膜电位(ΔΨm)的JC-1 检测 | 第32页 |
2.5 TUNEL凋亡染色 | 第32页 |
2.6 Caspase染色 | 第32页 |
2.7 凋亡相关基因的表达检测 | 第32页 |
2.8 数据分析 | 第32页 |
3. 结果 | 第32-37页 |
3.1 RES添加对猪卵母细胞孤雌激活胚胎体外发育能力的影响 | 第32-33页 |
3.2 RES添加对猪孤雌激活囊胚冻后存活与发育的影响 | 第33-34页 |
3.3 RES添加对猪孤雌激活囊胚冻后线粒体功能和凋亡水平的影响 | 第34-35页 |
3.4 RES添加对冷冻后猪孤雌激活囊胚Pan-Caspase、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 活性的影响 | 第35-37页 |
3.5 RES添加对猪孤雌激活囊胚冻后基因表达的影响 | 第37页 |
4. 讨论 | 第37-41页 |
第四章 Z-VAD-FMK对冷冻解冻后的猪孤雌激活囊胚发育和凋亡水平的影响 | 第41-49页 |
1. 材料 | 第41-42页 |
1.1 试剂和仪器 | 第41页 |
1.1.1 主要试剂 | 第41页 |
1.1.2 设备与耗材 | 第41页 |
1.2 溶液配制 | 第41-42页 |
2. 方法 | 第42页 |
2.1 卵母细胞的采集和体外成熟 | 第42页 |
2.2 卵母细胞的孤雌激活和体外培养 | 第42页 |
2.3 囊胚的玻璃化冷冻和解冻 | 第42页 |
2.4 线粒体膜电位(ΔΨm)的JC-1 检测 | 第42页 |
2.5 TUNEL凋亡染色 | 第42页 |
2.6 Caspase染色 | 第42页 |
2.7 凋亡相关基因的表达检测 | 第42页 |
2.8 数据分析 | 第42页 |
3. 结果 | 第42-47页 |
3.1 Z-VAD-FMK添加对猪孤雌激活囊胚冻后存活与发育的影响 | 第42-43页 |
3.2 Z-VAD-FMK添加对猪孤雌激活囊胚冻后线粒体功能和凋亡水平的影响 | 第43-44页 |
3.5 Z-VAD-FMK添加对冻后猪孤雌激活囊胚Pan-Caspase、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 活力的影响 | 第44-46页 |
3.6 冻后Z-VAD-FMK添加对猪孤雌激活囊胚冻后基因表达的影响 | 第46-47页 |
4. 讨论 | 第47-49页 |
全文总结 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
附录 | 第56-57页 |
硕士期间主要科研成果 | 第57-58页 |
致谢 | 第58页 |