| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-21页 |
| ·立题的背景和意义 | 第11-12页 |
| ·帕金森氏病的介绍 | 第12-14页 |
| ·帕金森氏病的发病机制及病理特征 | 第12页 |
| ·多巴胺及多巴胺能神经元 | 第12-14页 |
| ·多巴胺能神经元相关的分化基因 | 第14页 |
| ·microRNA的介绍 | 第14-21页 |
| ·microRNA的发现 | 第15页 |
| ·microRNA的生物合成机制 | 第15-16页 |
| ·microRNA的特征 | 第16-17页 |
| ·microRNA的作用机制及靶基因预测 | 第17-19页 |
| ·microRNA的作用机制 | 第17-18页 |
| ·microRNA靶基因预测 | 第18-19页 |
| ·microRNA对帕金森氏病的影响 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-29页 |
| ·材料与试剂 | 第21-27页 |
| ·仪器和设备 | 第21-22页 |
| ·试剂和耗材 | 第22-23页 |
| ·引物和测序 | 第23-25页 |
| ·动物、细胞和质粒 | 第25-27页 |
| ·计算机分析 | 第27-29页 |
| 第3章 实验方法 | 第29-49页 |
| ·实验技术路线 | 第29页 |
| ·靶基因的确定及对其具有调控作用的miRNA预测 | 第29页 |
| ·靶基因克隆 | 第29-37页 |
| ·小鼠神经干细胞(NPC)的培养 | 第29-31页 |
| ·PCR扩增靶基因及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第31-32页 |
| ·靶基因割胶回收 | 第32-33页 |
| ·靶基因与载体PsiCHECK-2的酶切和酶连 | 第33-35页 |
| ·转化 | 第35页 |
| ·单克隆菌落培养及测序 | 第35页 |
| ·克隆菌落测序结果比对及质粒提取、鉴定 | 第35-37页 |
| ·miRNA克隆 | 第37-41页 |
| ·lenti-137质粒提取(BIOMIGA质粒小提试剂盒) | 第37-38页 |
| ·PCR扩增miRNA及琼脂糖凝胶电泳检测 | 第38-39页 |
| ·纯化产物加A尾 | 第39页 |
| ·miRNA的TA克隆及重组质粒转化大肠杆菌 | 第39-40页 |
| ·单克隆菌落培养及测序 | 第40页 |
| ·miRNA单克隆菌落测序结果比对及质粒提取、鉴定 | 第40-41页 |
| ·细胞转染 | 第41-43页 |
| ·小鼠神经干细胞(NPC)的培养 | 第41页 |
| ·小鼠神经干细胞(NPC)的贴壁培养 | 第41-42页 |
| ·靶基因和miRNA共转染NPC | 第42-43页 |
| ·luciferase检测(Promega) | 第43页 |
| ·Western Blotting检测靶基因目的蛋白表达 | 第43-49页 |
| ·小鼠神经干细胞(NPC)的培养 | 第43页 |
| ·小鼠神经干细胞(NPC)的贴壁培养 | 第43-44页 |
| ·miRNA转染NPC | 第44-45页 |
| ·Western Blotting检测 | 第45-49页 |
| 第4章 结果与分析 | 第49-65页 |
| ·生物信息学预测对靶基因具有调控作用的miRNA | 第49-55页 |
| ·Microcosm Targets database预测结果 | 第49页 |
| ·MicroRNA.org预测结果 | 第49-50页 |
| ·TargetScan.预测结果 | 第50-51页 |
| ·miRanda预测结果 | 第51-55页 |
| ·初步筛选miRNA作为候选研究对象 | 第55页 |
| ·靶基因克隆 | 第55-59页 |
| ·小鼠NPC培养图谱 | 第55-56页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第56-57页 |
| ·靶基因的PCR扩增 | 第57页 |
| ·靶基因的单克隆菌液测序结果比对 | 第57-58页 |
| ·靶基因阳性克隆的质粒提取 | 第58-59页 |
| ·miRNA克隆 | 第59-61页 |
| ·miRNA的PCR扩增 | 第59-61页 |
| ·miRNA阳性克隆的质粒提取 | 第61页 |
| ·萤光素双报告基因检测 | 第61-63页 |
| ·神经干细胞(NPC)的贴壁培养 | 第61-62页 |
| ·靶基因和miRNA共转染后Luciferase检测结果 | 第62-63页 |
| ·Western Blotting检测目的基因表达 | 第63-65页 |
| 第5章 讨论 | 第65-67页 |
| ·生物信息学预测方法在RNA组学研究中的可行性 | 第65页 |
| ·DA神经元相关分化基因与miRNAs之间存在相关性 | 第65-66页 |
| ·以miRNAs为靶标治疗疾病的希望 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第72页 |
