| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 本文创新之处 | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-23页 |
| ·赭曲霉毒素A概述 | 第12-14页 |
| ·赭曲霉毒素A的物化性质 | 第12页 |
| ·赭曲霉毒素A的毒性 | 第12-13页 |
| ·赭曲霉毒素A的污染情况 | 第13页 |
| ·赭曲霉毒素A的限量和检测方法 | 第13-14页 |
| ·OTA的酶联免疫分析方法 | 第14-15页 |
| ·OTA竞争ELISA检测方法原理 | 第14页 |
| ·OTA标准品存在的问题及解决途径 | 第14-15页 |
| ·丝状噬菌体展示系统概述 | 第15-19页 |
| ·丝状噬菌体pⅢ展示系统 | 第15-17页 |
| ·丝状噬菌体pⅧ展示系统 | 第17-19页 |
| ·噬菌粒pC89S4存在的缺陷以及解决办法 | 第19-21页 |
| ·噬菌粒pC89S4 | 第19-20页 |
| ·pC89S4的缺陷及解决方法 | 第20-21页 |
| ·研究的目的、内容及意义 | 第21-23页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·研究意义 | 第22-23页 |
| 第2章 构建带有肠激酶切位点与赭曲霉毒素A模拟表位序列的载体 | 第23-35页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第24-26页 |
| ·主要材料 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·生化试剂 | 第25页 |
| ·溶液和培养基 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-31页 |
| ·制备寡核苷酸双链 | 第26页 |
| ·pC89S4质粒提取纯化 | 第26-27页 |
| ·质粒的回收 | 第27页 |
| ·pC89S4噬菌粒双酶切 | 第27-28页 |
| ·酶切产物纯化 | 第28页 |
| ·构建重组噬菌粒 | 第28-29页 |
| ·乙醇沉淀法纯化连接产物 | 第29页 |
| ·电转感受态细胞制备 | 第29-30页 |
| ·电转化 | 第30页 |
| ·阳性菌落的酶切验证 | 第30-31页 |
| ·测序验证 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·重组质粒pC89-COTA酶切验证 | 第31-33页 |
| ·测序验证 | 第33-34页 |
| ·讨论与小结 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 第3章 高密度OTA表位噬菌体的构建及无毒OTA ELISA检测方法的建立 | 第35-48页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第35-37页 |
| ·主要材料 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·生化试剂 | 第36页 |
| ·溶液和培养基 | 第36-37页 |
| ·实验方法与步骤 | 第37-43页 |
| ·制备敏感宿主菌悬液 | 第38页 |
| ·制备单个KM13噬菌斑 | 第38-39页 |
| ·KM13扩大培养 | 第39页 |
| ·KM13提取纯化 | 第39页 |
| ·KM13测滴度 | 第39-40页 |
| ·表位噬菌体扩增与纯化 | 第40页 |
| ·肠激酶酶切 | 第40-41页 |
| ·ELISA方法测定表位噬菌体 | 第41-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·纯种KM13扩增后的滴度 | 第43页 |
| ·重组噬菌体提取液蛋白质含量 | 第43-44页 |
| ·ELISA方阵滴定结果 | 第44页 |
| ·无毒ELISA分析方法标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| ·加标回收测定 | 第45-46页 |
| ·噬菌体酶切前后效果比较 | 第46页 |
| ·讨论与小结 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第4章 重组噬菌体表位蛋白表达量优化以及保存方法研究 | 第48-62页 |
| ·材料、仪器与试剂 | 第48-50页 |
| ·主要材料 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·生化试剂 | 第49页 |
| ·溶液和培养基 | 第49-50页 |
| ·实验方法与步骤 | 第50-53页 |
| ·辅助噬菌体加入量对OTA表位蛋白表达量的影响 | 第50-51页 |
| ·IPTG加入量对OTA表位蛋白表达量的影响 | 第51-52页 |
| ·IPTG加入时间对OTA表位蛋白表达量的影响 | 第52页 |
| ·OTA表位蛋白的保存研究 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-60页 |
| ·辅助噬菌体加入量与OTA表位蛋白表达量的关系 | 第53-55页 |
| ·IPTG加入量与OTA表位蛋白表达量的关系 | 第55-56页 |
| ·IPTG加入时间与OTA表位蛋白表达量的关系 | 第56-57页 |
| ·-20℃与4℃保存结果 | 第57-58页 |
| ·37℃加速保存结果 | 第58-59页 |
| ·保护剂优化结果 | 第59-60页 |
| ·讨论与小结 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第67页 |
| 个人简介 | 第67页 |
