| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 产黄青霉简介 | 第12-13页 |
| 1.1.1 产黄青霉的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 产黄青霉的价值 | 第12页 |
| 1.1.3 产黄青霉的研究 | 第12-13页 |
| 1.2 产黄青霉的工业应用简介 | 第13-14页 |
| 1.2.1 产黄青霉的发酵工艺优化 | 第13-14页 |
| 1.2.2 产黄青霉菌种的优化 | 第14页 |
| 1.3 顶头孢霉简介 | 第14-15页 |
| 1.3.1 顶头孢霉发现 | 第14页 |
| 1.3.2 顶头孢霉的价值 | 第14-15页 |
| 1.3.3 顶头孢霉的研究及工业应用 | 第15页 |
| 1.4 产黄青霉育种的重要性与策略 | 第15-17页 |
| 1.4.1 产黄青霉选育及改造的重要性 | 第15-16页 |
| 1.4.2 菌种随机诱变策略 | 第16页 |
| 1.4.3 菌种定向改造策略 | 第16-17页 |
| 1.4.4 菌种定向改造难点 | 第17页 |
| 1.5 原生质体转化技术 | 第17-18页 |
| 1.5.1 原生质体简介 | 第17页 |
| 1.5.2 原生质体转化技术 | 第17页 |
| 1.5.3 原生质体转化的应用 | 第17-18页 |
| 1.6 本文研究思路及内容 | 第18-20页 |
| 第2章 头孢菌素C相关基因和HSV-TK基因的克隆 | 第20-40页 |
| 2.1 前言 | 第20-22页 |
| 2.2 材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 菌种 | 第22页 |
| 2.2.2 材料 | 第22-23页 |
| 2.2.3 酶和试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 实验设备 | 第23-24页 |
| 2.2.5 培养基 | 第24-25页 |
| 2.3 方法 | 第25-32页 |
| 2.3.1 顶头孢霉的培养 | 第25页 |
| 2.3.2 基因组以及RNA的提取 | 第25页 |
| 2.3.3 RNA的反转录及目的基因扩增 | 第25-28页 |
| 2.3.4 HSV-TK基因的无模板合成 | 第28-30页 |
| 2.3.5 基因克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.6 转化子的筛选和验证 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.4.1 顶头孢霉RNA提取 | 第32页 |
| 2.4.2 cef G、cefD1、cefD2、cefEF基因的克隆结果 | 第32-36页 |
| 2.4.3 HSV-TK基因克隆 | 第36-38页 |
| 2.4.4 测序结果 | 第38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 转化片段的构建 | 第40-52页 |
| 3.1 引言 | 第40-41页 |
| 3.2 材料 | 第41页 |
| 3.2.1 菌种 | 第41页 |
| 3.2.2 材料 | 第41页 |
| 3.2.3 酶和试剂 | 第41页 |
| 3.2.4 实验设备 | 第41页 |
| 3.2.5 培养基 | 第41页 |
| 3.3 方法 | 第41-46页 |
| 3.3.1 产黄青霉和构巢曲霉的培养 | 第41-42页 |
| 3.3.2 真菌基因组的提取和细菌质粒提取 | 第42-43页 |
| 3.3.3 ku70上下游同源臂克隆 | 第43页 |
| 3.3.4 报告基因gfp、ble克隆 | 第43-44页 |
| 3.3.5 双向启动子和终止子的克隆 | 第44页 |
| 3.3.6 大片段的搭接 | 第44-46页 |
| 3.4 结果与分析 | 第46-49页 |
| 3.4.1 基因组提取验证 | 第46页 |
| 3.4.2 上下游同源臂以及双向启动子和终止子的克隆 | 第46-48页 |
| 3.4.3 基因的搭接 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49页 |
| 3.6 本章小结 | 第49-52页 |
| 第4章 产黄青霉突变株的构建及筛选 | 第52-64页 |
| 4.1 引言 | 第52-53页 |
| 4.2 材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 菌种 | 第53页 |
| 4.2.2 材料 | 第53页 |
| 4.2.3 酶和试剂 | 第53页 |
| 4.2.4 实验设备 | 第53页 |
| 4.2.5 培养基 | 第53-54页 |
| 4.3 方法 | 第54-55页 |
| 4.3.1 产黄青霉的培养 | 第54页 |
| 4.3.2 酶解液的制备 | 第54页 |
| 4.3.3 菌丝的酶解及与原生质体的制备 | 第54-55页 |
| 4.3.4 PEG-CaCl2介导的转化技术 | 第55页 |
| 4.3.5 原生质体再生 | 第55页 |
| 4.3.6 转化子的筛选 | 第55页 |
| 4.4 结果与分析 | 第55-60页 |
| 4.4.1 产黄青霉转化和再生结果 | 第55-56页 |
| 4.4.2 转化子的分子验证 | 第56-58页 |
| 4.4.3 转化片段的定位结果 | 第58-59页 |
| 4.4.4 gfp基因在产黄青霉中的表达结果 | 第59-60页 |
| 4.5 讨论 | 第60-63页 |
| 4.5.1 同源重组结果研究 | 第60-61页 |
| 4.5.2 酶对原生质体制备和再生的影响 | 第61页 |
| 4.5.3 产黄青霉转化与桔青霉转化比较 | 第61-63页 |
| 4.6 本章小结 | 第63-64页 |
| 第5章 产黄青霉等离子诱变育种 | 第64-74页 |
| 5.1 引言 | 第64-65页 |
| 5.2 材料 | 第65页 |
| 5.2.1 菌种 | 第65页 |
| 5.2.2 材料 | 第65页 |
| 5.2.3 酶和试剂 | 第65页 |
| 5.2.4 实验设备 | 第65页 |
| 5.2.5 培养基 | 第65页 |
| 5.3 方法 | 第65-67页 |
| 5.3.1 新鲜产黄青霉米孢子制备 | 第65-66页 |
| 5.3.2 孢子数量的确定 | 第66页 |
| 5.3.3 等离子诱变 | 第66-67页 |
| 5.3.4 诱变菌株的发酵微培养 | 第67页 |
| 5.3.5 菌株发酵检测 | 第67页 |
| 5.4 结果与分析 | 第67-70页 |
| 5.4.1 等离子诱变 | 第67-68页 |
| 5.4.2 产黄青霉突变株的发酵微培养 | 第68-69页 |
| 5.4.3 碘液法检测产黄青霉的发酵液 | 第69-70页 |
| 5.5 讨论 | 第70-71页 |
| 5.5.1 影响孢子产生的因素 | 第70页 |
| 5.5.2 不同孢子浓度和诱变时间对致死率的影响 | 第70-71页 |
| 5.5.3 青霉素发酵影响因素 | 第71页 |
| 5.6 本章小结 | 第71-74页 |
| 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
