| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 符号与缩略语说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 农杆菌简介 | 第10-16页 |
| 1.1.1 农杆菌的生物学特征及其类型 | 第10-11页 |
| 1.1.2 根癌农杆菌的结构特征及转化机制 | 第11-16页 |
| 1.1.2.1 Ti质粒 | 第12页 |
| 1.1.2.2 IV型分泌系统 | 第12-14页 |
| 1.1.2.3 T-DNA的转移与整合 | 第14-16页 |
| 1.2 VirD2结合蛋白(VirD2-binding protein,VBP) | 第16-20页 |
| 1.2.1 VBP蛋白的结构和功能 | 第16-18页 |
| 1.2.2 atu4860基因启动子区域的生物学信息分析结果 | 第18-20页 |
| 1.3 荧光蛋白在定量报告启动子活性方面的应用情况 | 第20-21页 |
| 1.3.1 eGFP | 第20-21页 |
| 1.3.2 TurboRFP | 第21页 |
| 1.4 研究内容、目的与意义 | 第21-24页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4.2 研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、引物 | 第24-26页 |
| 2.1.2 试剂、培养基、配方 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 pUCA19-N质粒的构建 | 第27-31页 |
| 2.2.1.1 pUCA19质粒的提取 | 第28页 |
| 2.2.1.2 PCR扩增pUCA19质粒片段(无lacZ’启动子) | 第28-29页 |
| 2.2.1.3 目的片段回收、酶切、连接 | 第29-30页 |
| 2.2.1.4 连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第30-31页 |
| 2.2.2 pUCA19-2G/RA双荧光报告载体的构建 | 第31-34页 |
| 2.2.2.1 重叠延伸PCR扩增atu3617启动子+rfp片段,并插入pUCA19-N质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.2.2 重叠延伸PCR扩增atu4860启动子+egfp片段,并插入已含有atu3617启动子+rfp片段的载体 | 第32-34页 |
| 2.2.3 启动子启动荧光基因表达的定性观察 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 重组质粒在大肠杆菌中表达情况的定性观察 | 第34页 |
| 2.2.3.2 重组质粒在农杆菌GMI9017△vbp2中表达情况的定性观察 | 第34-35页 |
| 2.2.4 启动子活性的定量检测 | 第35-37页 |
| 2.2.4.1 菌液荧光强度的定量 | 第35页 |
| 2.2.4.2 细菌总蛋白荧光强度的定量 | 第35-37页 |
| 2.2.5 致瘤诱导因素对atu4860启动子表达调控的影响 | 第37页 |
| 2.2.5.1 AS对atu4860启动子的诱导 | 第37页 |
| 2.2.5.2 pH对atu4860启动子的诱导 | 第37页 |
| 2.2.6 包含不同长度atu4860启动子的双荧光报告载体的构建 | 第37-38页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第38-56页 |
| 3.1 双荧光报告载体pUCA19-2G/RA的构建 | 第38-42页 |
| 3.1.1 双荧光报告质粒pUCA19-2G/RA的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.2 双荧光报告质粒pUCA19-2G/RA的基因测序鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.3 双荧光报告质粒pUCA19-2G/RA转化农杆菌GMI9017△vbp2的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2 启动子启动荧光基因表达的定性观察 | 第42-45页 |
| 3.3 启动子活性定量检测方法的建立 | 第45-48页 |
| 3.3.1 以活细胞的荧光强度定量表征荧光蛋白表达量的可靠性分析 | 第45-46页 |
| 3.3.2 细菌总蛋白的荧光强度与总蛋白中荧光蛋白含量的定量关系 | 第46-48页 |
| 3.4 致瘤诱导因素对atu4860启动子活性的影响 | 第48-53页 |
| 3.4.1 乙酰丁香酮(AS)对atu4860启动子活性的影响 | 第49-51页 |
| 3.4.2 pH对atu4860启动子活性的影响 | 第51-53页 |
| 3.5 atu4860启动子区DNA片段有效长度的确定 | 第53-56页 |
| 3.5.1 包含不同长度atu4860启动子的双荧光报告载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.5.2 双荧光报告载体转入农杆菌GMI9017△vbp2的鉴定 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第67-68页 |
