| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一章 PBo V的研究进展 | 第9-18页 |
| 1.1 病原学 | 第10-14页 |
| 1.1.1 PBoV的形态特征和物理、化学性质 | 第10-11页 |
| 1.1.2 PBoV的培养特性 | 第11页 |
| 1.1.3 PBoV基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.1.4 PBoV的复制特征 | 第12-13页 |
| 1.1.5 PBoV的分型 | 第13-14页 |
| 1.2 PBoV的流行病学 | 第14-15页 |
| 1.2.1 PBoV在国内的流行情况 | 第14-15页 |
| 1.2.2 PBoV在国外的流行情况 | 第15页 |
| 1.2.3 PBoV的致病机理 | 第15页 |
| 1.3 PBoV检测方法的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 普通PCR检测方法 | 第15页 |
| 1.3.2 荧光实时定量PCR检测方法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 RT-PCR检测方法 | 第16页 |
| 1.3.4 LAMP（Loop-mediate disothermal amplification）检测方法 | 第16页 |
| 1.3.5 间接免疫荧光检测方法 | 第16页 |
| 1.3.6 血清学检测方法ELISA | 第16页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 PBoV VP2截短基因的原核表达 | 第18-36页 |
| 2.1 材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 阳性病料、血清 | 第18页 |
| 2.1.2 主要化学试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基和常用试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.5 蛋白电泳的试剂配制 | 第20页 |
| 2.1.6 蛋白纯化试剂的配制 | 第20页 |
| 2.1.7 蛋白透析复性液的配制 | 第20页 |
| 2.1.8 Western blot试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 pMD-VP2重组克隆质粒的构建 | 第21-23页 |
| 2.2.2 PET-VP2重组表达质粒的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.3 重组表达质粒的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.4 重组蛋白的纯化、复性 | 第26页 |
| 2.2.5 复性后目的蛋白的Western blot分析 | 第26-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-34页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第27页 |
| 2.3.2 重组克隆质粒PMD-VP2的菌液PCR、双酶切和测序鉴定 | 第27-29页 |
| 2.3.3 重组表达质粒PET-VP2的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.4 重组表达质粒PET-VP2的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.5 重组蛋白的表达 | 第31-34页 |
| 2.3.6 重组蛋白的Western Blot鉴定 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 猪博卡病毒间接ELISA方法的建立及应用 | 第36-47页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 主要试验设备与材料 | 第36页 |
| 3.1.2 主要化学试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 溶液试剂的配制 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 间接ELISA实验步骤 | 第37页 |
| 3.2.2 最佳抗原包被浓度和一抗稀释度的确定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 最佳封闭液的确定 | 第38页 |
| 3.2.4 最佳封闭时间的确定 | 第38-39页 |
| 3.2.5 最佳一抗反应时间的确定 | 第39页 |
| 3.2.6 最佳酶标二抗稀释度的确定 | 第39页 |
| 3.2.7 最佳酶标二抗反应时间的确定 | 第39页 |
| 3.2.8 最佳底物显色时间的确定 | 第39页 |
| 3.2.9 阴、阳性血清临界值的确定 | 第39-40页 |
| 3.2.10 特异性验证 | 第40页 |
| 3.2.11 重复性试验 | 第40页 |
| 3.2.12 临床样品的检测 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-46页 |
| 3.3.1 抗原包被浓度及血清稀释倍数的确定 | 第40-41页 |
| 3.3.2 封闭液的确定 | 第41-42页 |
| 3.3.3 封闭时间的确定 | 第42页 |
| 3.3.4 血清反应时间的确定 | 第42-43页 |
| 3.3.5 酶标二抗稀释度的确定 | 第43页 |
| 3.3.6 酶标二抗反应时间的确定 | 第43-44页 |
| 3.3.7 显色时间的确定 | 第44页 |
| 3.3.8 间接ELISA阴、阳性血清临界值的确定 | 第44页 |
| 3.3.9 特异性试验 | 第44-45页 |
| 3.3.10 重复性试验 | 第45页 |
| 3.3.11 临床样品的检测 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第56页 |
