| 英文缩略词表 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 研究背景 | 第10-14页 |
| 1.1.1 甾体化合物 | 第10页 |
| 1.1.2 羟基化反应 | 第10-12页 |
| 1.1.3 细胞色素P450酶(CYP450) | 第12-13页 |
| 1.1.4 虎眼万年青 | 第13-14页 |
| 1.2 羟基化甾体的生物合成及意义 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-20页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第15页 |
| 2.1.3 试剂和耗材 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第16-17页 |
| 2.1.5 常见溶液配方 | 第17-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 感受态制备方法(CaCl_2法) | 第20页 |
| 2.2.2 克隆载体连接 | 第20页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的转化 | 第20-21页 |
| 2.2.4 重组子的筛选 | 第21页 |
| 2.2.5 重组蛋白的诱导 | 第21-22页 |
| 2.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第22页 |
| 2.2.7 蛋白染色-银染法 | 第22页 |
| 2.2.8 蛋白纯化及透析 | 第22-23页 |
| 2.2.9 酿酒酵母感受态的制备及LiAc转化方法 | 第23-24页 |
| 第三章 三种BM3突变体甾体底物特异性的研究 | 第24-43页 |
| 3.1 引言 | 第24页 |
| 3.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 3.2.1 表达载体的构建 | 第24-25页 |
| 3.2.2 定点突变 | 第25-26页 |
| 3.2.3 重组蛋白的表达和纯化 | 第26页 |
| 3.2.4 BM3突变体M01A82W、M01A82WS721和M11A82W催化甾体羟基化 | 第26-28页 |
| 3.3 实验结果 | 第28-42页 |
| 3.3.1 表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 3.3.3 BM3突变体M01A82W、M01A82WS72I和M11A82W催化甾体羟基化 | 第30-42页 |
| 3.4 本章总结与讨论 | 第42-43页 |
| 第四章 BM3突变体139-3催化甾体羟基化 | 第43-51页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 BM3突变体139-3重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| 4.2.2 BM3突变体139-3的异源表达 | 第44页 |
| 4.2.3 BM3突变体139-3催化甾体羟基化 | 第44页 |
| 4.2.4 BM3突变体139-3催化雄烯二酮羟基化的最适反应条件 | 第44-45页 |
| 4.2.5 BM3突变体139-3的随机突变 | 第45-46页 |
| 4.3 实验结果 | 第46-50页 |
| 4.3.1 表达载体pET28a1393和pCWori1393的构建 | 第46页 |
| 4.3.2 BM3突变体139-3的异源表达 | 第46-47页 |
| 4.3.3 BM3突变体139-3催化甾体羟基化 | 第47-49页 |
| 4.3.4 BM3突变体139-3催化雄烯二酮羟基化的最适反应条件 | 第49页 |
| 4.3.5 BM3突变体139-3的随机突变 | 第49-50页 |
| 4.4 本章总结与讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 虎眼万年青中P450基因的克隆和表达 | 第51-64页 |
| 5.1 引言 | 第51页 |
| 5.2 实验方法 | 第51-55页 |
| 5.2.1 虎眼万年青转录组测序及序列分析 | 第51页 |
| 5.2.2 虎眼万年青全cDNA的合成及P450基因的克隆 | 第51-53页 |
| 5.2.3 生物信息学分析 | 第53-54页 |
| 5.2.4 表达载体的构建及诱导表达 | 第54-55页 |
| 5.3 实验结果 | 第55-63页 |
| 5.3.1 虎眼万年青转录组测序结果分析 | 第55-56页 |
| 5.3.2 OsP450s的cDNA克隆 | 第56页 |
| 5.3.3 OsP450s的生物信息学分析 | 第56-61页 |
| 5.3.4 OsP450s表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 5.3.5 OsP450s的诱导表达 | 第62-63页 |
| 5.4 本章总结与讨论 | 第63-64页 |
| 第六章 全文总结与讨论 | 第64-66页 |
| 6.1 主要内容和意义 | 第64页 |
| 6.1.1 BM3突变体M01A82W、M01A82WS721和M11A82W甾体底物特异性研究 | 第64页 |
| 6.1.2 BM3突变体139-3催化甾体羟基化 | 第64页 |
| 6.1.3 虎眼万年青中P450基因的克隆和表达 | 第64页 |
| 6.2 论文创新点 | 第64-65页 |
| 6.3 论文不足之处 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 个人简介 | 第90页 |
