| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-22页 |
| 一、肝癌及临床治疗简介 | 第15-18页 |
| （一）肝癌及其风险因素 | 第15页 |
| （二）肝癌治疗策略 | 第15-17页 |
| （三）肝癌临床试验药物总结 | 第17-18页 |
| 二、Wnt信号通路与肝癌及其临床试验药物 | 第18-20页 |
| （一）Wnt信号通路简介 | 第18-19页 |
| （二）Wnt通路与肝癌 | 第19页 |
| （三）Wnt通路临床试验药物总结 | 第19-20页 |
| 三、鸦胆子苦素类化合物的抗肿瘤研究现状 | 第20-22页 |
| 第一章 Bruceine D体内抗肿瘤及协同索拉非尼抗肝癌研究 | 第22-31页 |
| 一、引言 | 第22页 |
| 二、实验材料 | 第22-24页 |
| （一）实验动物 | 第22页 |
| （二）实验用具 | 第22-23页 |
| （三）药品和试剂 | 第23页 |
| （四）主要仪器 | 第23-24页 |
| 三、实验方法 | 第24-26页 |
| （一）溶液配制 | 第24页 |
| （二）裸鼠肝癌原位异体移植瘤模型建立 | 第24页 |
| （三）药物处理和取材 | 第24-25页 |
| （四）细胞复苏、培养、冻存 | 第25页 |
| （五）肿瘤组织H&E染色分析 | 第25-26页 |
| （六）肿瘤组织免疫组织化学分析—TUNEL和Ki67 | 第26页 |
| 四、实验结果 | 第26-30页 |
| （一）BD抑制肝癌细胞在裸鼠肝脏内生长 | 第26-28页 |
| （二）BD增强索拉非尼体内抗肝癌作用 | 第28-30页 |
| 五、小结与讨论 | 第30-31页 |
| 第二章 Bruceine D抗肿瘤机制研究 | 第31-53页 |
| 一、引言 | 第31页 |
| 二、实验材料 | 第31-33页 |
| （一）细胞株及菌株 | 第31页 |
| （二）药品与试剂 | 第31-33页 |
| （三）实验仪器 | 第33页 |
| 三、实验方法 | 第33-43页 |
| （一）细胞培养 | 第33页 |
| （二）免疫印迹实验（Western blot） | 第33-37页 |
| （三）RT-PCR | 第37-39页 |
| （四）shJagged1和shβ-catenin干扰实验 | 第39-41页 |
| （五）Wnt通路激活剂及抑制剂处理对Jagged1蛋白表达影响 35 | 第41页 |
| （六）免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation） | 第41页 |
| （七）细胞核质分离实验 | 第41-42页 |
| （八）免疫荧光共聚焦 | 第42-43页 |
| （九）Wnt3a重组蛋白及GSK3β 抑制剂处理对BD作用的影响37 | 第43页 |
| （十）蛋白酶抑制剂处理验证BD对 β-catenin降解途径的影响 37 | 第43页 |
| （十一）CRM1抑制剂处理检测BD对 β-catenin出核途径的影响 | 第43页 |
| 四、实验结果 | 第43-51页 |
| （一）肝癌细胞上Wnt/β-catenin与Jagged1的调控关系及BD对Wnt通路转录水平的影响 | 第44-46页 |
| （二）BD对 β-catenin细胞核内水平的影响 | 第46-47页 |
| （三）BD对 β-catenin总量影响及与GSK3β 上游通路的关系 .. 41 | 第47-49页 |
| （四）BD诱导 β-catenin的蛋白酶体降解 | 第49页 |
| （五）BD对 β-catenin出核途径CRM1的影响 | 第49-50页 |
| （六）BD对肝癌组织中 β-catenin和Jagged1的表达量的影响 . 44 | 第50-51页 |
| 五、小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 Bruceine D抗肿瘤靶标验证 | 第53-65页 |
| 一、引言 | 第53页 |
| 二、实验材料 | 第53-54页 |
| （一）菌株 | 第53页 |
| （二）药品与试剂 | 第53-54页 |
| （三）实验仪器 | 第54页 |
| 三、实验方法 | 第54-60页 |
| （一）蛋白表达与纯化 | 第54-56页 |
| （二）Cellular Thermal Shift Assay（CETSA） | 第56-57页 |
| （三）Protein Thermal Shift Assay | 第57页 |
| （四）Biacore | 第57-59页 |
| （五）MicroScale Thermophoresis（MST） | 第59-60页 |
| 四、实验结果 | 第60-64页 |
| （一）CETSA | 第60页 |
| （二）Thermal Shift Assay | 第60-61页 |
| （三）Biacore | 第61-62页 |
| （四）MST | 第62-64页 |
| 五、小结与讨论 | 第64-65页 |
| 全文总结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 文献综述 | 第74-90页 |
| 参考文献 | 第81-90页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
