| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 缩写中英文对照 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-22页 |
| ·小麦黄花叶病 | 第12-14页 |
| ·病害分布、症状、危害与防治 | 第12-13页 |
| ·病害侵染循环 | 第13-14页 |
| ·小麦黄花叶病毒(WYMV)分子生物学研究 | 第14-17页 |
| ·基因组结构 | 第14-15页 |
| ·WYMV编码主要蛋白的功能 | 第15-17页 |
| ·P1蛋白 | 第15-16页 |
| ·P2蛋白 | 第16页 |
| ·VPg | 第16页 |
| ·HC-Pro | 第16-17页 |
| ·研究WYMV RNA2功能所采用实验技术 | 第17-21页 |
| ·基因沉默 | 第17-19页 |
| ·植物中基因沉默的病毒抑制 | 第17-18页 |
| ·农杆菌介导转化 | 第18-19页 |
| ·农杆菌共浸润的瞬时表达 | 第19页 |
| ·BiFC及荧光定位 | 第19-21页 |
| ·BiFC的原理 | 第19-20页 |
| ·BiFC的操作方法 | 第20-21页 |
| ·BiFC的研究应用 | 第21页 |
| ·研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-34页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌种和载体 | 第22页 |
| ·试剂和仪器 | 第22-23页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-34页 |
| ·ELISA检测 | 第23-24页 |
| ·试剂及缓冲液 | 第23页 |
| ·间接ELISA | 第23-24页 |
| ·植物总RNA的提取 | 第24页 |
| ·RT-PCR | 第24-25页 |
| ·PCR产物纯化 | 第25-26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·感受态细胞制备 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl_2法) | 第26-27页 |
| ·电转化感受态细胞制备 | 第27页 |
| ·转化 | 第27-28页 |
| ·热激转化 | 第27页 |
| ·电转化 | 第27-28页 |
| ·乙醇沉淀 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第28页 |
| ·质粒DNA少量提取 | 第28-29页 |
| ·BD载体质粒提取 | 第29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·酶切 | 第30页 |
| ·载体末端去磷酸化 | 第30页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及检测 | 第30-31页 |
| ·目的蛋白纯化和回收 | 第31页 |
| ·Western-blotting | 第31-34页 |
| ·SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·Western-blotting检测 | 第32-34页 |
| 第三章 原核表达WYMV P1融合蛋白制备抗血清及检测 | 第34-40页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·WYMV P1蛋白基因克隆与序列分析 | 第34-35页 |
| ·原核表达质粒构建 | 第35页 |
| ·WYMV-P1融合蛋白诱导表达及检测 | 第35页 |
| ·目的蛋白纯化与回收 | 第35页 |
| ·P1蛋白抗血清制备及检测 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·WYMV P1基因克隆与序列分析 | 第35-36页 |
| ·原核表达质粒构建 | 第36-37页 |
| ·pGEX 6P-1-P1融合蛋白的诱导表达及检测 | 第37页 |
| ·目的蛋白回收与纯化 | 第37-38页 |
| ·抗血清制备 | 第38-39页 |
| ·P1蛋白的血清学检测 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 小麦黄花叶病毒RNA2沉默抑制的研究 | 第40-47页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·质粒和菌株 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-43页 |
| ·WYMV RNA2基因克隆 | 第40-41页 |
| ·重组质粒构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒转入农杆菌 | 第42页 |
| ·农杆菌浸润烟草 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·WYMV RNA2基因克隆 | 第43页 |
| ·重组质粒构建 | 第43-44页 |
| ·WYMV RNA2编码基因沉默抑制子能力的鉴定 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 WYMV RNA2部分蛋白对PVX症状的影响 | 第47-53页 |
| ·材料与方法 | 第47-49页 |
| ·实验材料 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-49页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·农杆菌介导pGR106的侵染体系 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-51页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·嵌合体病毒接种烟草后症状表达 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第六章 WYMV P1蛋白在昆虫及植物细胞内的荧光定位 | 第53-64页 |
| ·材料与方法 | 第53-55页 |
| ·载体与菌种 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-55页 |
| ·重组质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·重组穿梭质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·昆虫细胞的转染及共杆菌介导的转染 | 第55页 |
| ·共聚焦显微镜观察 | 第55页 |
| ·结果与分析 | 第55-62页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第56页 |
| ·昆虫细胞中定位 | 第56-59页 |
| ·P1蛋白的荧光定位 | 第57页 |
| ·P1蛋白的自我互作 | 第57-58页 |
| ·P1蛋白与WYMV RNA1编码的其他蛋白互作 | 第58-59页 |
| ·烟草细胞中荧光定位 | 第59-62页 |
| ·P1蛋白的荧光定位 | 第59页 |
| ·VPg蛋白的荧光定位 | 第59-60页 |
| ·P1蛋白的自我互作 | 第60页 |
| ·P1蛋白与VPg蛋白的互作 | 第60-61页 |
| ·WYMV-P1蛋白与WYMV-VPg植物细胞内共表达 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第七章 结论与展望 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64页 |
| ·展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 附录 | 第73-77页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
