| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-21页 |
| ·miRNA | 第9-13页 |
| ·miRNA概述 | 第9-10页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第10-12页 |
| ·miRNA研究方法 | 第12-13页 |
| ·miRNA在斑马鱼中的研究 | 第13-15页 |
| ·miRNA在斑马鱼早期胚胎发育中的研究 | 第13-14页 |
| ·miRNA在斑马鱼其他组织发育中的研究 | 第14-15页 |
| ·miR-202的研究现状 | 第15-16页 |
| ·miR-202在哺乳动物中的研究 | 第15页 |
| ·miR-202在脊椎动物中的研究 | 第15-16页 |
| ·CRISPR/Cas9系统 | 第16-19页 |
| ·CRISPR/Cas9系统概述 | 第16-18页 |
| ·CRISPR/Cas9系统的应用研究进展 | 第18-19页 |
| ·本研究的主要内容和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-37页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·仪器和试剂 | 第21-24页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·所用各种试剂、试剂盒及缓冲液 | 第22-24页 |
| ·方法和步骤 | 第24-37页 |
| ·生物信息学方法 | 第24页 |
| ·斑马鱼受精卵显微注射 | 第24-25页 |
| ·miR-202反义核苷酸抑制及挽救 | 第25-26页 |
| ·miRNA分离和实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第26-27页 |
| ·CRISPR/Cas9系统敲除miR-202 | 第27-35页 |
| ·斑马鱼胚胎整体原位杂交 | 第35-37页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第37-53页 |
| ·斑马鱼早期胚胎发育过程中miR-202的表达量变化 | 第37-38页 |
| ·利用qRT-PCR检测各时期miR-202的表达量变化 | 第37页 |
| ·利用整体原位杂交检测斑马鱼各个时期miR-202的表达 | 第37-38页 |
| ·利用反义核苷酸抑制斑马鱼受精卵miR-202 | 第38-40页 |
| ·斑马鱼受精卵中过表达miR-202 | 第40-41页 |
| ·斑马鱼胚胎挽救实验 | 第41-42页 |
| ·CRISPR/Cas9系统定点突变斑马鱼miR-202 | 第42-44页 |
| ·CRISPR/Cas9系统片段敲除斑马鱼miR-202 | 第44-50页 |
| ·获得TS1、TS2、TS3靶点的sgRNA | 第44-45页 |
| ·检测各靶点的有效性 | 第45-46页 |
| ·检测并筛选F0代杂合突变体 | 第46-48页 |
| ·检测F1代胚胎发育 | 第48页 |
| ·检测F2代纯合突变体及表型 | 第48-50页 |
| ·利用斑马鱼整体原位杂交检测miR-202表达量变化 | 第50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
