| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-18页 |
| 缩写词 | 第18-19页 |
| 1 绪论 | 第19-38页 |
| ·几丁质 | 第19-21页 |
| ·几丁质的结构 | 第19-20页 |
| ·几丁质的降解 | 第20-21页 |
| ·几丁质酶 | 第21-31页 |
| ·几丁质酶的来源和分类 | 第21-23页 |
| ·几丁质酶的空间结构与催化机制 | 第23-27页 |
| ·几丁质酶酶活测定方法 | 第27-28页 |
| ·酶解产物的检测分析 | 第28-29页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第29-31页 |
| ·几丁质结合蛋白(CBP)的研究 | 第31-34页 |
| ·CBP的定义与分类 | 第31-32页 |
| ·CBP结构与功能 | 第32-34页 |
| ·海洋环境几丁质酶研究进展 | 第34-37页 |
| ·论文的研究思路和内容 | 第37-38页 |
| 2 产低温几丁质酶菌株的筛选与鉴定 | 第38-52页 |
| ·引言 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-42页 |
| ·样品来源 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·胶体几丁质和培养基的配制 | 第39页 |
| ·产酶菌株的筛选 | 第39-40页 |
| ·产酶菌株的鉴定 | 第40-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-50页 |
| ·产酶菌株的筛选结果 | 第42-44页 |
| ·产酶菌株16S rDNA序列分析与系统发育树的构建 | 第44-46页 |
| ·产酶菌株最适温度的研究 | 第46-47页 |
| ·产酶菌株生长曲线与产酶曲线的测定 | 第47-48页 |
| ·菌株DL-6粗酶液最适反应温度和温度稳定性的测定 | 第48-49页 |
| ·SDS-PAGE及酶谱分析 | 第49页 |
| ·菌株DL-6几丁质酶系的初步研究 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 3 几丁质酶系基因的克隆与序列分析 | 第52-69页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料与方法 | 第52-55页 |
| ·菌株 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·几丁质酶系基因的克隆 | 第53-55页 |
| ·几丁质酶系基因的生物信息学分析 | 第55页 |
| ·同源模建 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-67页 |
| ·几丁质酶系基因全序列的克隆 | 第55-56页 |
| ·几丁质酶系基因及其编码氨基酸序列分析 | 第56-59页 |
| ·chiA和chiC基因编码氨基酸序列与保守氨基酸残基的分析 | 第59-62页 |
| ·同源模建ChiA和ChiC的三维结构分析保守的催化氨基酸 | 第62-64页 |
| ·CBP58编码氨基酸序列保守氨基酸残基的分析 | 第64-67页 |
| ·本章小结 | 第67-69页 |
| 4 几丁质酶系蛋白的重组表达与纯化 | 第69-83页 |
| ·引言 | 第69页 |
| ·材料与方法 | 第69-74页 |
| ·菌株 | 第69-70页 |
| ·质粒 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| ·实验仪器 | 第70页 |
| ·几丁质酶系基因表达质粒的构建 | 第70-72页 |
| ·重组质粒的菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序鉴定 | 第72页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第72-73页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第73-74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-82页 |
| ·chiA/chiC/CBP58基因表达质粒的构建 | 第74-77页 |
| ·ChiA/ChiC/CBP58在大肠杆菌内的重组表达 | 第77页 |
| ·ChiA/ChiC/CBP58的Ni-NTA亲和纯化 | 第77-80页 |
| ·重组蛋白的酶谱分析 | 第80-81页 |
| ·4-甲基伞形酮荧光底物检测ChiA和ChiC酶活性 | 第81-82页 |
| ·本章小结 | 第82-83页 |
| 5 几丁质酶ChiA和ChiC的生化性质表征 | 第83-101页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·材料与方法 | 第83-87页 |
| ·主要试剂 | 第83-84页 |
| ·实验仪器 | 第84-85页 |
| ·4-甲基伞形酮荧光底物测定酶活 | 第85页 |
| ·铁氰化钾法(Schales法)测定还原糖含量 | 第85页 |
| ·酶学性质表征 | 第85-86页 |
| ·酶动力学参数的测定 | 第86-87页 |
| ·底物特异性 | 第87页 |
| ·高效液相色谱(HPLC)分析酶的作用方式 | 第87页 |
| ·酶的降解产物分析 | 第87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-100页 |
| ·重组蛋白ChiA和ChiC酶学性质研究 | 第87-93页 |
| ·酶动力学参数的测定 | 第93-94页 |
| ·ChiA和ChiC的底物特异性 | 第94-95页 |
| ·ChiA和ChiC的降解模式 | 第95-98页 |
| ·ChiA和ChiC降解产物的分析 | 第98-100页 |
| ·本章小结 | 第100-101页 |
| 6 几丁质结合蛋白CBP58底物结合与协同降解作用研究 | 第101-109页 |
| ·引言 | 第101页 |
| ·材料与方法 | 第101-103页 |
| ·实验仪器 | 第101页 |
| ·CBP58的功能研究 | 第101-103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-108页 |
| ·扫描电子显微镜(SEM)观察CBP58底物结合 | 第103页 |
| ·CBP58与不同底物结合活性测定 | 第103-105页 |
| ·几丁质酶系协同降解机制研究 | 第105-108页 |
| ·本章小结 | 第108-109页 |
| 7 总结与展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 附录A Pseudoalteromonas sp.DL-6的16S rDNA序列 | 第125-126页 |
| 附录B 几丁质酶chiA的序列 | 第126-129页 |
| 附录C 几丁质酶chiC的序列 | 第129-130页 |
| 附录D 几丁质结合蛋白CBP58的序列 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 作者简介 | 第132-133页 |
