| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| ·本课题的研究目的与意义 | 第14-15页 |
| ·动物孵化分子机理研究进展 | 第15-20页 |
| ·脊椎动物孵化分子机理研究进展 | 第15-17页 |
| ·昆虫孵化分子机理研究进展 | 第17-19页 |
| ·其它动物孵化分子机理研究进展 | 第19-20页 |
| ·本文主要研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 桑蟥孵化酶基因（RmHE）的克隆与特性分析 | 第22-42页 |
| ·实验材料与方法 | 第22-35页 |
| ·实验材料与试剂 | 第22页 |
| ·常用试剂和缓冲液的配制 | 第22-24页 |
| ·实验仪器和设备 | 第24页 |
| ·生物信息学分析软件 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·RmHE 第一链 cDNA 的合成 | 第26页 |
| ·PCR 克隆 RmHE 部分片段 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶的制备与电泳 | 第27-28页 |
| ·DNA 目的片段的回收 | 第28页 |
| ·目的片段与 pMD-18 载体的连接 | 第28页 |
| ·质粒 DNA 的转化 | 第28-29页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒 DNA | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·甘油菌的制备与序列测定 | 第30页 |
| ·RmHE 基因 3′端序列的扩增 | 第30-32页 |
| ·RmHE 基因 5′端序列的扩增 | 第32-34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34页 |
| ·RmHE 在桑蟥胚胎不同发育时期的半定量 RT-PCR 分析 | 第34页 |
| ·RmHE 在幼虫不同组织中的表达谱 | 第34-35页 |
| ·实验结果与分析 | 第35-40页 |
| ·RmHE 部分 cDNA 序列的克隆 | 第35页 |
| ·RmHE 全长的克隆与序列分析 | 第35-36页 |
| ·RmHE 蛋白的三维结构 | 第36-39页 |
| ·胚胎不同发育阶段中 RmHE 转录本水平的变化 | 第39-40页 |
| ·幼虫不同组织中 RmHE 表达谱 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 RmHE 的原核表达与功能验证 | 第42-54页 |
| ·材料与方法 | 第42-47页 |
| ·材料与试剂 | 第42页 |
| ·常用试剂和缓冲液的配制 | 第42-44页 |
| ·ORF 序列、去信号肽序列与成熟酶序列对应核苷酸序列的克隆 | 第44-45页 |
| ·原核表达重组载体的构建 | 第45页 |
| ·RmHE 蛋白的原核表达 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第45-46页 |
| ·Western Blotting | 第46-47页 |
| ·桑蟥幼虫各组织蛋白的提取及 Western Blot 检测 | 第47页 |
| ·实验结果与分析 | 第47-51页 |
| ·ORF 序列、去信号肽序列与成熟酶序列对应核苷酸序列的克隆 | 第47-48页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的原核表达与 Western Blotting | 第49-50页 |
| ·桑蟥幼虫各组织蛋白的表达与 Western Blot 检测 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 小菜蛾孵化酶基因（PxHE）的克隆、表达与特性分析 | 第54-68页 |
| ·实验材料与方法 | 第54-57页 |
| ·实验材料与试剂 | 第54-55页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·PCR 克隆 PxHE 部分片段 | 第55页 |
| ·PxHE 基因 3'端与 5'端序列的扩增 | 第55页 |
| ·生物信息学分析 | 第55-56页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第56页 |
| ·PCR 检测基因结构 | 第56页 |
| ·原核表达重组载体的构建 | 第56-57页 |
| ·PxHE 蛋白的原核表达与 Western Blotting | 第57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-65页 |
| ·PxHE 部分 cDNA 序列的克隆 | 第57页 |
| ·PxHE 全长的克隆 | 第57-59页 |
| ·PxHE 蛋白的三维结构 | 第59-61页 |
| ·序列比对和进化分析 | 第61-63页 |
| ·PxHE 的基因结构 | 第63页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第63-64页 |
| ·重组蛋白的原核表达与 Western Blotting | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
