| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 生物矿化的概述 | 第12页 |
| 2 生物矿化与蛋白调控 | 第12-13页 |
| 3 磷蛋白对生物矿化的影响 | 第13-16页 |
| ·骨桥蛋白与生物矿化 | 第13页 |
| ·骨唾液酸蛋白与生物矿化 | 第13-14页 |
| ·牙本质磷蛋白与生物矿化 | 第14-15页 |
| ·牙本质基质蛋白与生物矿化 | 第15-16页 |
| 4 Phosvitin与生物矿化 | 第16-18页 |
| ·Phosvitin的组成和结构 | 第16-17页 |
| ·Phosvitin与生物矿化 | 第17-18页 |
| 5 细胞培养技术在生物矿化中的应用 | 第18-21页 |
| ·成骨细胞 | 第18页 |
| ·体外成骨细胞分离培养的应用 | 第18-19页 |
| ·骨形成有关的生化指标 | 第19-21页 |
| ·碱性磷酸酶(ALP) | 第20页 |
| ·骨钙蛋白(OCN) | 第20页 |
| ·骨形态发生蛋白-2(BMP-2) | 第20-21页 |
| ·核心结合因子(Runx-2) | 第21页 |
| ·Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ) | 第21页 |
| 6 实时定量RT-PCR技术在生物矿化研究中的应用 | 第21-22页 |
| 7 本课题选题的学术思想 | 第22-24页 |
| ·研究目的和意义 | 第22页 |
| ·学术思路 | 第22-23页 |
| ·主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 鸡胚胎发育期间与骨骼发育相关指标的测定 | 第24-36页 |
| 1 材料与方法 | 第24-27页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·原料 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-27页 |
| ·实验设计 | 第26页 |
| ·蛋黄样品的采集 | 第26页 |
| ·蛋清蛋黄pH测定 | 第26页 |
| ·蛋黄中钙磷含量的测定 | 第26-27页 |
| ·胚胎胫骨中ALP活性的测定 | 第27页 |
| ·胚胎体长及胫骨长度测定 | 第27页 |
| ·数据处理 | 第27页 |
| 2 结果与分析 | 第27-34页 |
| ·孵化期间蛋清、蛋黄pH值的变化 | 第27-29页 |
| ·孵化期间蛋黄中总钙、总磷含量的变化 | 第29-30页 |
| ·孵化期间鸡胚胫骨中碱性磷酸酶(ALP)活力的变化 | 第30页 |
| ·孵化期间鸡胚胫骨长度及鸡胚体长的变化 | 第30-32页 |
| ·相关性分析 | 第32-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 4 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 鸡胚胎发育过程中phosvitin的变化 | 第36-50页 |
| 1 材料与方法 | 第37-41页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·原料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器和设备 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·实验设计 | 第38页 |
| ·蛋黄样品的采集 | 第38页 |
| ·phosvitin的分离与纯化 | 第38-39页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第39页 |
| ·Phosvitin中有机磷含量的测定 | 第39-40页 |
| ·Phosvitin中有机氮含量的测定 | 第40页 |
| ·磷蛋比(P/N radio)的计算 | 第40页 |
| ·红外光谱测定 | 第40页 |
| ·圆二色谱测定 | 第40-41页 |
| ·数据处理 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-47页 |
| ·孵化期间phosvitin分子量测定 | 第41-42页 |
| ·孵化期间phosvitin磷氮比的变化 | 第42-43页 |
| ·孵化期间phosvitin红外吸收图谱分析 | 第43-44页 |
| ·孵化期间phosvitin二级结构的变化 | 第44-47页 |
| ·红外光谱分析法 | 第44-45页 |
| ·圆二色谱分析法 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 4 小结 | 第48-50页 |
| 第四章 Phosvitin对MC3T3-E1细胞生长的影响 | 第50-66页 |
| 1 材料与方法 | 第50-56页 |
| ·材料 | 第50-52页 |
| ·原料 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器和设备 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-56页 |
| ·实验设计 | 第52页 |
| ·Phosvitin提取纯化 | 第52-53页 |
| ·细胞培养操作程序 | 第53-54页 |
| ·CCK-8法测定细胞增殖 | 第54-55页 |
| ·流式细胞仪测定细胞周期 | 第55页 |
| ·MC3T3-E1细胞凋亡率的检测(流式法) | 第55-56页 |
| ·数据处理 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-65页 |
| ·Phosvitin纯度鉴定 | 第56-57页 |
| ·MC3T3-E1细胞生长曲线的测定 | 第57-58页 |
| ·Phosvitin对MC3T3-E1细胞活力的影响 | 第58-59页 |
| ·Phosvitin对MC3T3-E1细胞周期的影响 | 第59-62页 |
| ·Phosvitin对MC3T3-E1细胞凋亡的影响 | 第62-65页 |
| 3 讨论 | 第65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 第五章 Phosvitin对MC3T3-E1细胞矿化的影响 | 第66-84页 |
| 1 材料与方法 | 第66-72页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·原料 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器和设备 | 第67-68页 |
| ·方法 | 第68-72页 |
| ·实验设计 | 第68-69页 |
| ·Phosvitin提取纯化 | 第69页 |
| ·细胞培养操作程序 | 第69页 |
| ·成骨细胞中ALP活性测定 | 第69-70页 |
| ·矿化结节茜素红染色 | 第70页 |
| ·MC3T3-E1细胞总RNA提取与RT-PCR反应 | 第70-72页 |
| ·数据处理 | 第72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-81页 |
| ·诱导矿化实验的接种密度的确立 | 第72-74页 |
| ·茜素红染色结果 | 第74-75页 |
| ·碱性磷酸酶(ALP)活力测定结果 | 第75-76页 |
| ·MC3T3-E1诱导矿化相关基因mRNA表达量的测定 | 第76-81页 |
| ·不同矿化诱导剂对Runx-2 mRNA表达量的影响 | 第76-78页 |
| ·不同矿化诱导剂对BMP-2 mRNA表达量的影响 | 第78-79页 |
| ·不同矿化诱导剂对Col-Ⅰ mRNA表达量的影响 | 第79-80页 |
| ·不同矿化诱导剂对OCN mRNA表达量的影响 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-82页 |
| 4 小结 | 第82-84页 |
| 第六章 结论和展望 | 第84-87页 |
| 1 结论 | 第84-85页 |
| 2 创新性 | 第85页 |
| 3 延续研究计划 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
