| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-32页 |
| 1. 果实成熟相关水解酶的研究 | 第12-14页 |
| ·多聚半乳糖醛酸酶(PG)研究 | 第13页 |
| ·果胶脂酶的研究 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶和β-半乳糖苷酶的研究 | 第14页 |
| 2. N-聚糖加工研究 | 第14-17页 |
| ·N-聚糖加工的生物合成途径 | 第15-17页 |
| ·植物N-聚糖功能研究 | 第17页 |
| 3. α-甘露糖苷酶基因研究进展 | 第17-20页 |
| ·α-甘露糖苷酶基因的功能 | 第17-18页 |
| ·α-甘露糖苷酶基因在果实成熟中的功能研究进展 | 第18-20页 |
| ·呼吸跃变型果实中的α-甘露糖苷酶基因功能鉴定 | 第19-20页 |
| ·非呼吸跃变型果实中的α-甘露糖苷酶基因功能鉴定 | 第20页 |
| 4. 外源基因瞬时表达的研究进展 | 第20-24页 |
| ·农杆菌介导瞬时表达技术操作流程 | 第22页 |
| ·植物中的农杆菌介导瞬时表达技术研究进展 | 第22-24页 |
| 5. 本研究的目的及意义 | 第24页 |
| 参考文献 | 第24-32页 |
| 第二章 α-甘露糖苷酶基因的克隆与表达分析 | 第32-47页 |
| 1. 材料和试剂 | 第33-34页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌种质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| 2. 实验方法 | 第34-39页 |
| ·引物设计与合成 | 第34-35页 |
| ·克隆引物的设计与合成 | 第34页 |
| ·定量PCR检测引物设计与合成 | 第34-35页 |
| ·甜瓜果实总RNA的提取 | 第35页 |
| ·α-Man基因全长cDNA序列的克隆 | 第35-37页 |
| ·反转录反应 | 第35页 |
| ·cDNA序列的PCR扩增 | 第35页 |
| ·PCR产物纯化 | 第35-36页 |
| ·连接反应 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第36页 |
| ·转化的筛选与测序 | 第36-37页 |
| ·菌体PCR检测 | 第37页 |
| ·甜瓜α-甘露糖苷酶活性测定 | 第37-38页 |
| ·定量PCR检测基因的表达特性 | 第38-39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·RNA提取 | 第39页 |
| ·RT-PCR扩增cDNA | 第39-40页 |
| ·cDNA克隆及序列分析 | 第40-42页 |
| ·重组质粒的快速提取法筛选 | 第40页 |
| ·重组质粒的菌体PCR检测 | 第40-41页 |
| ·序列分析 | 第41-42页 |
| ·甜瓜α-甘露糖苷酶活性测定 | 第42-43页 |
| ·定量PCR检测α-Man基因的表达特性 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 第三章 应用瞬时表达技术分析α-Man基因的功能 | 第47-69页 |
| 1. 材料和试剂 | 第48页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·菌种质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| 2. 实验方法 | 第48-55页 |
| ·引物设计与合成 | 第48-50页 |
| ·表达载体构建的引物设计 | 第48-49页 |
| ·定量PCR检测引物的设计与合成 | 第49-50页 |
| ·α-Man基因超表达和RNAi载体构建 | 第50-53页 |
| ·超表达载体pPZP221(35S-α-Man-nos)的构建 | 第50-51页 |
| ·RNAi载体pART-Man的构建 | 第51-53页 |
| ·在甜瓜果实中瞬时表达 | 第53-55页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化 | 第53-54页 |
| ·浸染液制备 | 第54页 |
| ·菌液注射甜瓜果实 | 第54-55页 |
| ·α-甘露糖苷酶活性测定 | 第55页 |
| ·甜瓜果实总RNA的提取 | 第55页 |
| ·定量PCR检测果实注射部位的基因表达特性分析 | 第55页 |
| 3. 结果与分析 | 第55-65页 |
| ·α-Man基因表达载体构建 | 第55-61页 |
| ·超表达载体pPZP221(35-α-Man-nos)构建 | 第55-56页 |
| ·RNAi表达载体pART-Man的构建 | 第56-61页 |
| ·瞬时表达条件的优化 | 第61-62页 |
| ·α-甘露糖苷酶活性测定 | 第62-63页 |
| ·α-Man基因表达特性分析 | 第63-64页 |
| ·果实成熟相关基因的表达特性分析 | 第64-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 第四章 α-甘露糖苷酶基因超表达和RNAi载体转化甜瓜 | 第69-86页 |
| 1. 材料和试剂 | 第70页 |
| ·植物材料 | 第70页 |
| ·菌种质粒 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70页 |
| 2. 实验方法 | 第70-75页 |
| ·引物设计与合成 | 第70-72页 |
| ·检测引物设计 | 第70-71页 |
| ·定量PCR检测引物的设计与合成 | 第71-72页 |
| ·花粉管通道法转化甜瓜 | 第72页 |
| ·转化植株的检测及筛选 | 第72-75页 |
| ·甜瓜叶片总DNA提取方案 | 第73-74页 |
| ·Oe-Man和Ri-Man基因转化植株的PCR检测 | 第74页 |
| ·T_0代转Oe-Man和α-Man基甜瓜株系的选育 | 第74页 |
| ·T_1代转Oe-Man和α-Man基因甜瓜株系的选育 | 第74-75页 |
| ·T_2代转Ri-Man基因耐贮甜瓜株系的获得 | 第75页 |
| 3. 结果与分析 | 第75-84页 |
| ·遗传转化及筛选 | 第75-82页 |
| ·遗传转化 | 第75页 |
| ·T_0代植株的DNA提取 | 第75-76页 |
| ·T_0代Oe-Man基因转化植株的检测 | 第76-77页 |
| ·T_0代植株Ri-Man基因转化植株的检测 | 第77页 |
| ·T_1代植株的筛选 | 第77-82页 |
| ·转Ri-Man T_2代果实中的基因表达分析与酶活性测定 | 第82-83页 |
| ·转Ri-Man T_2代果实中的果实成熟相关基因表达特性分析 | 第83-84页 |
| 4. 讨论 | 第84页 |
| 参考文献 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 | 第89页 |
