| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 符号说明及縮写词 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-35页 |
| ·粘细菌概述 | 第17-18页 |
| ·粘细菌的运动 | 第18-28页 |
| ·A运动系统 | 第19-20页 |
| ·S运动系统 | 第20-28页 |
| ·Type Ⅳ pili | 第21-24页 |
| ·ECM组成及其功能 | 第24-26页 |
| ·LPS O-antigen | 第26页 |
| ·S运动产生机制 | 第26-28页 |
| ·Biacore技术介绍 | 第28-31页 |
| ·Biacore技术原理 | 第28-30页 |
| ·Biacore实验基本步骤 | 第30-31页 |
| ·等温滴定量热技术介绍 | 第31-33页 |
| ·论文思路及研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 黄色粘球菌DK1622 PilA蛋白的异源表达与胞外多糖EPS组分分析 | 第35-57页 |
| ·材料 | 第36-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·试剂 | 第37-38页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-46页 |
| ·pilA基因序列生物信息学分析 | 第39页 |
| ·表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·pilA基因片段的扩增及连接 | 第40-44页 |
| ·引物的设计及合成 | 第40-41页 |
| ·pilA基因片段的扩增 | 第41-42页 |
| ·PilA基因片段与载体的连接 | 第42-43页 |
| ·pilA基因在E.coli中的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·亲和层析方法提取PilA蛋白 | 第44页 |
| ·胞外多糖EPS的提取 | 第44-45页 |
| ·EPS的提取步骤 | 第44-45页 |
| ·硫酸蒽酮法测量样品中糖含量 | 第45页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第45页 |
| ·EPS糖组分的测定 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-54页 |
| ·pilA基因生物信息学分析 | 第46页 |
| ·pET15b-pilA载体构建结果 | 第46-47页 |
| ·PilA蛋白的表达及条件优化 | 第47-48页 |
| ·PilA蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·离子交换层析纯化PilA蛋白 | 第49-51页 |
| ·EPS提取结果 | 第51-53页 |
| ·硫酸蒽酮法测量样品中碳含量 | 第51页 |
| ·Pierce BCA Protein Assay kit测定蛋白含量 | 第51-53页 |
| ·DNA/RNA酶处理 | 第53页 |
| ·GC/MS实验结果 | 第53-54页 |
| ·本章小结 | 第54-57页 |
| 第三章 黄色粘球菌DK1622中胞外多糖EPS与PilA蛋白相互作用组分分析 | 第57-71页 |
| ·材料 | 第57-58页 |
| ·试剂 | 第57-58页 |
| ·仪器设备与耗材 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·生物分子相互作用分析 | 第58-60页 |
| ·等温量热滴定反应 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-70页 |
| ·Biacore实验相关结果 | 第61-66页 |
| ·PilA蛋白偶联结果 | 第61-62页 |
| ·PilA蛋白与单糖相互作用结果 | 第62-66页 |
| ·等温滴定结果分析 | 第66-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 黄色粘球菌DK1622中PilA蛋白中与EPS相互作用的位点预测 | 第71-89页 |
| ·材料 | 第71-73页 |
| ·菌株与质粒 | 第71-72页 |
| ·培养基 | 第72页 |
| ·实验试剂 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-76页 |
| ·PilA蛋白生物信息学分析 | 第73页 |
| ·突变载体的构建 | 第73-74页 |
| ·点突变载体的构建 | 第74-75页 |
| ·引物设计及合成 | 第74页 |
| ·点突变载体的扩增 | 第74-75页 |
| ·PCR片段的消化处理及纯化 | 第75页 |
| ·电转化 | 第75-76页 |
| ·异源蛋白的表达 | 第76页 |
| ·Biacore实验方法 | 第76页 |
| ·ITC实验方法 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-89页 |
| ·PilA蛋白生物信息学分析 | 第76-79页 |
| ·PilA结构表面分析 | 第79-81页 |
| ·PilA蛋白蛋白位点的保守性分析 | 第81-83页 |
| ·相互作用位点预测 | 第83页 |
| ·PilA蛋白点突变载体的构建 | 第83-85页 |
| ·PilA突变蛋白的纯化 | 第85-86页 |
| ·利用ITC技术检测突变蛋白的功能 | 第86-89页 |
| 总结与展望 | 第89-91页 |
| 附录 | 第91-101页 |
| 参考文献 | 第101-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第111-112页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第112页 |
