| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 研究背景 | 第13-33页 |
| ·纤维素的结构 | 第14-15页 |
| ·纤维素的生物降解 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶系 | 第16-18页 |
| ·厌氧菌的纤维素酶 | 第16页 |
| ·好氧菌的纤维素酶 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第17-18页 |
| ·β-葡萄糖苷酶研究现状 | 第18-27页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分布 | 第18-19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分类 | 第19页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的提取方法 | 第19-20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的纯化方法 | 第20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的结构和催化机制 | 第20-21页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的结构 | 第20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第20-21页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的酶学性质 | 第21-24页 |
| ·分子量 | 第22页 |
| ·最适温度及热稳定性 | 第22-23页 |
| ·最适pH值、PI值 | 第23页 |
| ·底物特异性 | 第23页 |
| ·金属离子及抑制剂 | 第23-24页 |
| ·动力学常数 | 第24页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的转糖基作用 | 第24页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的酶活测定方法 | 第24-25页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第25-27页 |
| ·低温β-葡萄糖苷酶研究现状 | 第27页 |
| ·哈氏噬纤维菌研究现状 | 第27-28页 |
| ·原核表达及pMAL表达体系 | 第28-31页 |
| ·大肠杆菌宿主菌 | 第28-29页 |
| ·pMAL表达系统 | 第29-31页 |
| ·论文的立题和工作思路 | 第31-33页 |
| 第二章 外膜β-葡萄糖苷酶的发现 | 第33-45页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·菌种 | 第33页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第33页 |
| ·试剂与仪器 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·Native PAGE | 第34-35页 |
| ·缓冲液配制 | 第34页 |
| ·Native PAGE凝胶配制、电泳、复性、反应及显色 | 第34-35页 |
| ·外膜蛋白的提取及Native PAGE | 第35页 |
| ·蛋白质谱鉴定 | 第35-36页 |
| ·cDNA及蛋白序列分析软件 | 第36-37页 |
| ·实验结果与分析 | 第37-43页 |
| ·外膜蛋白的提取及鉴定 | 第37页 |
| ·DNS序列分析 | 第37-41页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第41-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 CHU_2273的原核表达和纯化 | 第45-59页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌种、质粒、引物 | 第45页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第45-46页 |
| ·SDS PAGE缓冲液配制 | 第46页 |
| ·试剂及仪器 | 第46-47页 |
| ·分析软件 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-54页 |
| ·哈氏噬纤维菌基因组的提取 | 第47-48页 |
| ·克隆载体的构建及转化 | 第48-52页 |
| ·引物设计 | 第48页 |
| ·目的基因的扩增 | 第48-49页 |
| ·凝胶DNA回收 | 第49页 |
| ·双酶切反应 | 第49页 |
| ·连接 | 第49-50页 |
| ·PCR产物回收 | 第50页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第50-51页 |
| ·大肠杆菌感受态的转化 | 第51页 |
| ·重组载体质粒的提取 | 第51页 |
| ·分析插入片段 | 第51页 |
| ·大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第51页 |
| ·热激转化 | 第51-52页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的诱导与表达 | 第52-54页 |
| ·SDS PAGE | 第52-53页 |
| ·CHU_2273的纯化 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-57页 |
| ·基因组DNA的抽提 | 第54页 |
| ·目的基因克隆路线 | 第54-56页 |
| ·CHU_2273目的基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·pMAL C2X载体阳性重组子的鉴定 | 第55-56页 |
| ·阳性重组子的序列测定及分析 | 第56页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的诱导表达纯化 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 CHU 2273的性质研究 | 第59-76页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·菌种 | 第59页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第59页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-64页 |
| ·薄层层析 | 第59-60页 |
| ·HPLC定性检测 | 第60页 |
| ·离子色谱定性检测 | 第60页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第60-61页 |
| ·β-葡萄糖苷酶性质的测定 | 第61-62页 |
| ·绘制PNP标准曲线 | 第61页 |
| ·酶活性的测定方法 | 第61-62页 |
| ·酶最适温度和最适pH的测定 | 第62页 |
| ·酶热稳定性测定 | 第62-63页 |
| ·比活力的测定 | 第63页 |
| ·动力学常数测定 | 第63页 |
| ·金属离子和化合物对酶活的影响 | 第63页 |
| ·Glu和NaCl对酶的抑制作用分析 | 第63页 |
| ·底物特异性 | 第63-64页 |
| ·对寡糖的降解 | 第64页 |
| ·转糖基作用 | 第64页 |
| ·实验结果与分析 | 第64-74页 |
| ·PNP标准曲线的绘制 | 第64-65页 |
| ·蛋白浓度标准曲线的绘制 | 第65页 |
| ·酶最适反应温度 | 第65-66页 |
| ·酶最适反应PH值 | 第66页 |
| ·热稳定性 | 第66-67页 |
| ·比酶活与动力学常数测定 | 第67-68页 |
| ·金属离子及化合物对CHU_2273活性的影响 | 第68-69页 |
| ·Glu和NaCl对CHU_2273抑制作用分析 | 第69-70页 |
| ·底物特异性 | 第70页 |
| ·水解产物分析 | 第70-72页 |
| ·转糖基作用 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 全文总结及展望 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第86页 |