| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-17页 |
| 1 引言 | 第17-41页 |
| ·蒙古马概述 | 第17页 |
| ·蒙古白马文化概述 | 第17-18页 |
| ·乌珠穆沁白马文化历史 | 第18-19页 |
| ·国际上对马褪色毛表型的研究现状 | 第19-21页 |
| ·马的毛色及形成机制 | 第21-24页 |
| ·与被毛褪色形成有关的候选基因 | 第24-26页 |
| ·本课题研究的基因 | 第26-36页 |
| ·黑色素皮质激素受体1(MC1R)基因 | 第26-28页 |
| ·野灰位点信号蛋白(ASIP)基因 | 第28-30页 |
| ·原癌(KIT)基因的研究现状 | 第30-34页 |
| ·突触融合蛋白17(STX-17)基因 | 第34-35页 |
| ·膜相关转运蛋白(MATP)基因 | 第35-36页 |
| ·内皮素受体B(EDNRB)基因 | 第36页 |
| ·毛色研究新方法的介绍 | 第36-39页 |
| ·常用的甲基化修饰检测方法 | 第37-39页 |
| ·本研究的目的、意义及主要内容 | 第39-41页 |
| ·本研究的目的 | 第39页 |
| ·蒙古白马毛色遗传的研究意义 | 第39页 |
| ·本研究的主要内容及技术路线 | 第39-41页 |
| 2 试验一 研究个体的毛色分子生物学鉴定 | 第41-57页 |
| ·实验材料 | 第41-45页 |
| ·实验样品 | 第41-42页 |
| ·仪器设备 | 第42-43页 |
| ·主要试剂 | 第43-44页 |
| ·主要试剂和溶液的配制 | 第44-45页 |
| ·主要分子生物学软件及相关网站 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·血液基因组DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·扩增各候选基因所使用的引物 | 第46-47页 |
| ·引物的配制 | 第47页 |
| ·不同毛色候选基因分子生物学鉴定方法 | 第47-48页 |
| ·PCR反应体系及过程 | 第48-50页 |
| ·结果及分析 | 第50-54页 |
| ·基因组DNA的提取结果 | 第50页 |
| ·各基因的PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| ·各毛色候选基因的分型结果 | 第51-54页 |
| ·各基因分型与不同毛色个体之间的相关性分析结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 3 试验二 不同毛色蒙古马毛色候选基因皮肤中表达量差异分析 | 第57-76页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·实验动物材料 | 第57页 |
| ·主要仪器设备 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·皮肤组织中Total-RNA的提取 | 第57-58页 |
| ·反转录反应体系的建立及条件的优化 | 第58页 |
| ·QRT-PCR反应 | 第58-60页 |
| ·标准品的制备及标准曲线的制作 | 第60页 |
| ·数据分析方法 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-68页 |
| ·皮肤组织中Total-RNA的提取结果 | 第61页 |
| ·蒙古马β-actin及毛色相关基因的QRT-PCR扩增结果 | 第61-68页 |
| ·讨论 | 第68-76页 |
| ·实时荧光定量PCR的特点 | 第68页 |
| ·实时荧光定量PCR的引物设计 | 第68-69页 |
| ·内参基因的选择 | 第69页 |
| ·实施荧光定量PCR的结果评估 | 第69页 |
| ·实时荧光定量PCR结果的数据分析方法 | 第69-70页 |
| ·试验样品选择及基因表达分析说明 | 第70页 |
| ·毛色基因表达量及毛色形成间的关系 | 第70-76页 |
| 4 试验三 蒙古白马毛色形成候选基因编码区多态性研究 | 第76-83页 |
| ·实验材料及方法 | 第76页 |
| ·实验动物 | 第76页 |
| ·主要的仪器设备 | 第76页 |
| ·主要的试剂 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-79页 |
| ·血液基因组的提取 | 第76页 |
| ·引物设计 | 第76-77页 |
| ·PCR反应体系及过程 | 第77-78页 |
| ·目的片段的回收及纯化 | 第78-79页 |
| ·测序及数据分析 | 第79页 |
| ·试验结果与分析 | 第79-83页 |
| ·血液基因组提取结果 | 第79页 |
| ·目的片段扩增后纯化结果 | 第79-80页 |
| ·序列比对结果 | 第80-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| 5 试验四 蒙古马KIT蛋白在皮肤中的差异表达研究 | 第83-90页 |
| ·实验材料与方法 | 第83-84页 |
| ·实验材料 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-87页 |
| ·皮肤组织蛋白抽提 | 第84-85页 |
| ·BCA法进行蛋白浓度检测 | 第85-86页 |
| ·蛋白浓度调整 | 第86页 |
| ·目的蛋白WB正式实验 | 第86-87页 |
| ·内参蛋白WB正式实验 | 第87页 |
| ·实验结果与分析 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| ·抗体的选择 | 第88页 |
| ·Western blotting实验中的注意事项 | 第88-89页 |
| ·对本实验的结果分析 | 第89-90页 |
| 6 试验五 KIT基因5’调控区甲基化差异分析 | 第90-106页 |
| ·实验材料与方法 | 第90-92页 |
| ·实验动物 | 第90页 |
| ·常用生化试剂 | 第90页 |
| ·主要试剂盒及相关试剂 | 第90-91页 |
| ·常用试剂及其配制 | 第91页 |
| ·主要分子生物学软件及相关网站 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-100页 |
| ·PCR扩增不同毛色蒙古马KIT基因的5’调控区 | 第92-94页 |
| ·重亚硫酸氢盐-测序法分析蒙古马KIT基因5’调控区 | 第94-100页 |
| ·结果与分析 | 第100-103页 |
| ·KIT基因5’调控区CpG岛分析 | 第100-102页 |
| ·皮肤中提取的DNA结果 | 第102页 |
| ·蒙古马KIT基因的5’调控区的扩增结果 | 第102-103页 |
| ·KIT基因5’调控区BSP扩增测序结果 | 第103-106页 |
| ·KIT基因5’调控区BSP扩增结果 | 第103-104页 |
| ·菌落PCR鉴定阳性重组结果 | 第104页 |
| ·阳性重组质粒提取结果 | 第104页 |
| ·KIT 5’调控区BSP扩增结果酶切鉴定 | 第104-105页 |
| ·KIT基因5’调控区的BSP扩增测序结果分析 | 第105-106页 |
| 7 结论、讨论、创新点及进一步需要研究的问题 | 第106-110页 |
| ·结论 | 第106页 |
| ·讨论 | 第106-109页 |
| ·创新点及需要进一步研究的问题 | 第109-110页 |
| ·本论文的创新点 | 第109页 |
| ·需要进一步研究的问题 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-120页 |
| 附录 | 第120-123页 |
| 作者简介 | 第123页 |
