海参溶菌酶在毕赤酵母中的表达及生物活性研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| ·溶菌酶简介 | 第12-16页 |
| ·溶菌酶的结构及理化性质 | 第12-13页 |
| ·溶菌酶的结构 | 第12-13页 |
| ·溶菌酶的理化性质 | 第13页 |
| ·溶菌酶的生物学功能 | 第13-14页 |
| ·溶菌酶的分类 | 第14-16页 |
| ·噬菌体溶菌酶 | 第14页 |
| ·微生物源溶菌酶 | 第14-15页 |
| ·植物源溶菌酶 | 第15页 |
| ·c 型溶菌酶 | 第15-16页 |
| ·g 型溶菌酶 | 第16页 |
| ·i 型溶菌酶 | 第16页 |
| ·溶菌酶的应用 | 第16-21页 |
| ·食品工业上的应用 | 第16-18页 |
| ·在乳制品中的应用 | 第16-17页 |
| ·水产类制品的保鲜和防腐 | 第17页 |
| ·酒及饮料防腐中的应用 | 第17-18页 |
| ·食品软包装中的应用 | 第18页 |
| ·保健功能性食品中的应用 | 第18页 |
| ·医学上的应用 | 第18-19页 |
| ·疾病治疗中的应用 | 第18页 |
| ·疾病诊断中的应用 | 第18-19页 |
| ·饲料工业上的应用 | 第19-20页 |
| ·优质新型的绿色保健饲料添加剂 | 第19页 |
| ·良好的饲料防腐杀菌剂 | 第19页 |
| ·改善肠道微生物群，提高抗病力 | 第19-20页 |
| ·防治仔猪腹泻 | 第20页 |
| ·生物工程上的应用 | 第20页 |
| ·水产养殖上的应用 | 第20-21页 |
| ·溶菌酶基因工程的研究进展 | 第21-22页 |
| ·以大肠杆菌为宿主 | 第21页 |
| ·以巴斯德毕赤酵母为宿主 | 第21-22页 |
| ·以霉菌为宿主 | 第22页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第22-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的特点 | 第22-23页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的组成及构建 | 第23-24页 |
| ·表达宿主菌 | 第23页 |
| ·表达载体 | 第23-24页 |
| ·转化及整合 | 第24页 |
| ·研究的主要内容、目的、意义和技术路线 | 第24-27页 |
| ·研究的主要内容 | 第24-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第25页 |
| ·技术路线 | 第25-27页 |
| ·海参溶菌酶基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·海参溶菌酶基因的毕赤酵母表达 | 第26页 |
| ·重组海参溶菌酶的纯化及生物活性研究 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-47页 |
| ·海参溶菌酶基因的克隆 | 第27-33页 |
| ·材料与仪器 | 第27-29页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·菌种与质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要溶液 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·方法与步骤 | 第29-33页 |
| ·引物的设计 | 第29页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR | 第30-31页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第31-32页 |
| ·连接克隆载体及转化 DH5α | 第32页 |
| ·转化子的鉴定 | 第32-33页 |
| ·海参溶菌酶重组毕赤酵母的构建与表达 | 第33-44页 |
| ·材料与仪器 | 第33-38页 |
| ·菌种与质粒 | 第33页 |
| ·酶与主要试剂 | 第33页 |
| ·主要溶液 | 第33-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·方法与步骤 | 第38-44页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·质粒 DNA 的回收 | 第38-39页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第40-41页 |
| ·转化子的筛选 | 第41页 |
| ·转化子的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组海参溶菌酶的诱导表达 | 第42页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第42-44页 |
| ·重组海参溶菌酶的纯化 | 第44-45页 |
| ·溶菌酶活性的测定方法 | 第44页 |
| ·蛋白质含量的测定方法 | 第44页 |
| ·硫酸铵分级沉淀 | 第44-45页 |
| ·阳离子交换层析 | 第45页 |
| ·重组海参溶菌酶的生物学研究 | 第45-47页 |
| ·溶菌酶活性的检测 | 第45页 |
| ·海参溶菌酶的酶学性质 | 第45-46页 |
| ·最适 pH 和温度 | 第45-46页 |
| ·pH 稳定性和热稳定性 | 第46页 |
| ·海参溶菌酶的抑菌谱的测定 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第47-62页 |
| ·SJL 基因的亚克隆 | 第47-50页 |
| ·SJL 基因的扩增 | 第47-48页 |
| ·克隆载体的转化 | 第48-49页 |
| ·阳性转化子的测序鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组毕赤酵母的构建与表达 | 第50-56页 |
| ·双酶切重组克隆载体和表达载体 | 第50页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第50-52页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第52-53页 |
| ·重组毕赤酵母的筛选 | 第53-55页 |
| ·SJL 的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·重组海参溶菌酶的纯化 | 第56-58页 |
| ·蛋白质含量标准曲线 | 第56页 |
| ·rSJL 的纯化结果 | 第56-58页 |
| ·rSJL 的生物学研究 | 第58-62页 |
| ·rSJL 的最适 pH 和温度 | 第58-59页 |
| ·rSJL 的 pH 稳定性和热稳定性 | 第59-60页 |
| ·rSJL 的抑菌谱测定 | 第60-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 附录 A | 第67-68页 |
| 附录 B | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
