| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-40页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·V-ATPASE 的结构，亚细胞定位以及组装 | 第14-16页 |
| ·V-型 ATPASE 活性的调节 | 第16-18页 |
| ·二硫键的可逆性转变 | 第17页 |
| ·质子泵密度 | 第17页 |
| ·V1与 V0domain 可逆性组装 | 第17-18页 |
| ·质子转运和 ATP 水解之间的偶联 | 第18页 |
| ·V-ATPASE 的抑制因子与活化因子 | 第18-19页 |
| ·V-ATPASE 的功能 | 第19-21页 |
| ·在胞吐过程中，协助囊泡运输 | 第19页 |
| ·在内吞的过程中，参与囊泡运输 | 第19-21页 |
| ·植物中 V-ATPASE 各亚基功能的研究进展 | 第21-23页 |
| ·哪些生命活动 V-ATPase 的功能是必须的？ | 第21页 |
| ·哪些生命活动 V 型 ATPase 虽然重要，但不是必须的？ | 第21-22页 |
| ·V-ATPase 调节植物的盐耐受 | 第22-23页 |
| ·V-ATPase 调节气孔的运动及气孔的发育 | 第23页 |
| ·气孔的形态及生理学意义 | 第23-24页 |
| ·气孔发育的调节 | 第24-27页 |
| ·早期行使功能的基因 | 第25-27页 |
| ·晚期行使功能的基因 | 第27页 |
| ·气孔运动的调节 | 第27-33页 |
| ·离子通道与转运蛋白 | 第27-28页 |
| ·植物激素 | 第28-31页 |
| ·CO_2 | 第31页 |
| ·H_2O_2 | 第31页 |
| ·NO | 第31-32页 |
| ·微丝 | 第32页 |
| ·其他参与调节气孔运动的因子 | 第32-33页 |
| ·三大质子泵与气孔运动之间的关联 | 第33页 |
| ·课题的提出与研究意义 | 第33-34页 |
| ·课题的研究内容与技术路线 | 第34-37页 |
| ·课题的研究内容 | 第34-37页 |
| ·技术路线 | 第37页 |
| ·创新点 | 第37-40页 |
| 2 OSVHA-A 基因和 OSVL-A 基因的表达谱分析和相关载体的构建(过表达、RNAI、GFP、酵母载体). | 第40-72页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-44页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·菌株和表达载体 | 第40-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| ·培养基和溶液 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-57页 |
| ·OsVHA-A 基因的生物信息学分析 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44-46页 |
| ·水稻 RNA 的提取 | 第46页 |
| ·水稻 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR | 第47页 |
| ·半定量与定量 PCR | 第47-48页 |
| ·OsVHA-A 基因的表达谱分析 | 第48页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的克隆 | 第48-52页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的过表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的 GFP 融合载体构建 | 第53-54页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的酵母表达载体构建 | 第54页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的 GUS 融合载体构建 | 第54-55页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的 RNAi 载体构建 | 第55-57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-70页 |
| ·不同物种间 OsVHA-A 同源性分析和进化分析 | 第57-59页 |
| ·水稻 OsVHA-A 的表达谱分析 | 第59-61页 |
| ·水稻 OsVHA-A 和 OsVL-A 基因的克隆与分析 | 第61-62页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的过表达载体构建与分析 | 第62-64页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的 GFP 融合载体构建与分析 | 第64-66页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的酵母表达载体构建与分析 | 第66-67页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的 GUS 融合载体构建与分析 | 第67-68页 |
| ·OsVHA-A 和 OsVL-A 的 RNAi 载体构建与分析 | 第68-70页 |
| ·结论和讨论 | 第70-72页 |
| 3 OSVHA-A 基因的转基因研究 | 第72-92页 |
| ·引言 | 第72页 |
| ·材料 | 第72-76页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·基本培养基和溶液 | 第73页 |
| ·酵母互补实验所用培养基和溶液 | 第73-75页 |
| ·转化水稻所用植物组织培养基 | 第75-76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·仪器设备 | 第76页 |
| ·实验方法 | 第76-82页 |
| ·酵母菌的转化 | 第76-77页 |
| ·酵母互补的验证 | 第77页 |
| ·农杆菌的转化 | 第77-78页 |
| ·农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第78页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞 | 第78-79页 |
| ·根癌农杆菌介导法转化水稻愈伤组织 | 第79-80页 |
| ·转化植株检测 | 第80-81页 |
| ·半定量分析转基因植株 | 第81页 |
| ·实时荧光定量 PCR 鉴定转基因植株 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-91页 |
| ·酵母互补验证 | 第82-83页 |
| ·OsVHA-A 相关载体转入农杆菌的鉴定 | 第83-86页 |
| ·OsVHA-A 亚细胞定位 | 第86-87页 |
| ·OsVHA-A 组培幼苗表型的观察 | 第87-88页 |
| ·OsVHA-A 相关转基因植株 T0 代阳性株的鉴定 | 第88-89页 |
| ·OsVHA-A 过表达和 RNAi T1 代阳性株的鉴定 | 第89-90页 |
| ·OsVHA-A 过表达和 RNAi T2 代阳性株的鉴定 | 第90-91页 |
| ·结论与讨论 | 第91-92页 |
| 4 PHB-OSVHA-A-RNAI 转基因植株生化功能研究 | 第92-98页 |
| ·引言 | 第92页 |
| ·材料 | 第92-93页 |
| ·植物材料 | 第92页 |
| ·植物培养基及缓冲液 | 第92-93页 |
| ·主要仪器设备 | 第93页 |
| ·实验方法 | 第93-95页 |
| ·水稻幼苗培养条件 | 第93页 |
| ·粗膜蛋白的提取 | 第93-94页 |
| ·V-ATPase 和 V-PPase 酶活的检测 | 第94页 |
| ·水稻根部液泡 pH 值的测定 | 第94-95页 |
| ·实验结果与分析 | 第95-97页 |
| ·pHB-OsVHA-A-RNAi 转基因株系中，V-ATPase 和 V-PPase 活性检测与分析 | 第95-96页 |
| ·pHB-OsVHA-A-RNAi 转基因株系中，液泡 pH 值的检测与分析 | 第96-97页 |
| ·结论与讨论 | 第97-98页 |
| 5 PHB-OSVHA-A-RNAI 转基因植株在正常生理条件下的发育功能研究 | 第98-110页 |
| ·引言 | 第98页 |
| ·材料 | 第98-99页 |
| ·植物材料 | 第98页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第98页 |
| ·实验试剂 | 第98页 |
| ·实验主要仪器 | 第98-99页 |
| ·实验方法 | 第99-100页 |
| ·水稻幼苗培养条件 | 第99页 |
| ·水稻幼苗根长、苗长统计 | 第99页 |
| ·水稻叶片气孔观察 | 第99页 |
| ·水稻叶片气孔统计 | 第99页 |
| ·水稻离体叶片失水率 | 第99-100页 |
| ·OsVHA-A 基因的过表达植株和 RNAi 植株田间农艺性状观察 | 第100页 |
| ·叶绿素含量测定[176] | 第100页 |
| ·实验结果与分析 | 第100-107页 |
| ·pHB-OsVHA-A-RNAi 转基因植株在生理条件下气孔发育统计与分析 | 第100-102页 |
| ·pHB-OsVHA-A-RNAi 转基因植株离体叶片失水率统计与分析 | 第102-103页 |
| ·pHB-OsVHA-A-RNAi 转基因幼苗在生理条件下生长率统计与分析 | 第103-104页 |
| ·pHB-OsVHA-A-RNAi 转基因植株的农艺性状观察与分析 | 第104-107页 |
| ·结论与讨论 | 第107-110页 |
| 6 OSVHA-A-RNAI 转基因植株在逆境条件下的应答机制研究 | 第110-126页 |
| ·引言 | 第110页 |
| ·材料 | 第110-111页 |
| ·植物材料 | 第110页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第110页 |
| ·主要仪器设备 | 第110-111页 |
| ·实验方法 | 第111-113页 |
| ·水稻幼苗的培养与逆境胁迫的处理 | 第111页 |
| ·实时荧光定量 PCR 分析基因的表达 | 第111-112页 |
| ·水稻叶片在干旱处理条件下叶片气孔的观察 | 第112页 |
| ·在干旱处理条件下水稻叶片气孔开度和密度的统计 | 第112页 |
| ·原子吸收光谱测 Na+和 K+含量 | 第112页 |
| ·H+流速的检测 | 第112页 |
| ·叶片渗透压的测定 | 第112-113页 |
| ·叶片电导率的测定 | 第113页 |
| ·实验结果与分析 | 第113-124页 |
| ·OsVHA-A-RNAi 转基因植株在盐胁迫条件下的表型与机制分析 | 第113-116页 |
| ·OsVHA-A-RNAi 转基因植株在干旱迫条件下的表型与机制分析 | 第116-124页 |
| ·结论与讨论 | 第124-126页 |
| 7 主要结论和展望 | 第126-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-146页 |
| 附录：攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第146页 |
