| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-25页 |
| 1 热休克蛋白研究概况 | 第14-19页 |
| ·热休克蛋白的起源 | 第14页 |
| ·热休克蛋白的分类 | 第14-15页 |
| ·热休克蛋白在生物体内的分布 | 第15页 |
| ·热休克蛋白的基因结构 | 第15-16页 |
| ·HSP60的基因结构 | 第15-16页 |
| ·HSP70的基因结构 | 第16页 |
| ·HSP90的基因结构 | 第16页 |
| ·热休克蛋白基因的转录、表达和调控 | 第16-17页 |
| ·转录水平的调控 | 第17页 |
| ·翻译水平的调控 | 第17页 |
| ·热休克蛋白的生物学功能 | 第17-19页 |
| ·伴侣角色 | 第17-18页 |
| ·提高生物体的耐受性 | 第18页 |
| ·生物进化 | 第18-19页 |
| ·生物标志物 | 第19页 |
| ·其它功能 | 第19页 |
| 2 热休克蛋白在水产动物应激研究中的应用 | 第19-23页 |
| ·鱼类热休克蛋白的研究进展 | 第19-21页 |
| ·分离基因的常用技术 | 第21-22页 |
| ·简并PCR | 第21页 |
| ·削减PCR | 第21-22页 |
| ·RACE-PCR | 第22页 |
| ·基因表达的常规分析方法 | 第22-23页 |
| ·Northern印迹杂交 | 第22-23页 |
| ·RNA酶保护试验 | 第23页 |
| ·荧光定量PCR | 第23页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第一章 唐鱼热休克蛋白基因cDNA全长的克隆及生物信息学分析 | 第25-82页 |
| 第一节 唐鱼热休克蛋白60基因cDNA全长的克隆及生物信息学分析 | 第25-50页 |
| 1 材料与方法 | 第25-38页 |
| ·实验材料 | 第25-27页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·溶液的配制 | 第27页 |
| ·培养基的配制 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-38页 |
| ·RNA提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA模板制备 | 第28-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第31-32页 |
| ·HSP60简并引物PCR扩增 | 第32页 |
| ·PCR产物的分离、回收和纯化 | 第32-33页 |
| ·回收产物与载体连接 | 第33页 |
| ·重组质粒的转化 | 第33-34页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第34页 |
| ·菌落阳性检测及测序 | 第34-35页 |
| ·HSP60 5’末端未知序列克隆 | 第35-36页 |
| ·HSP60 3’末端未知序列克隆 | 第36-37页 |
| ·cDNA序列生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-49页 |
| ·总RNA提取及HSP60基因中间片段的克隆 | 第38页 |
| ·HSP60 5’和3’末端序列的克隆 | 第38-40页 |
| ·5’末端序列的克隆 | 第38-39页 |
| ·3’末端序列的克隆 | 第39-40页 |
| ·生物信息学分析 | 第40-49页 |
| ·HSP60基因cDNA序列分析 | 第40-42页 |
| ·基因推导蛋白的分析 | 第42-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 第二节 唐鱼热休克蛋白70基因cDNA全长的克隆及生物信息学分析 | 第50-65页 |
| 1 材料与方法 | 第50-53页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·总RNA提取 | 第50页 |
| ·cDNA模板制备 | 第50-51页 |
| ·引物的设计 | 第51-52页 |
| ·HSP70中间片段扩增及克隆 | 第52页 |
| ·HSP70 5’末端PCR扩增及克隆 | 第52-53页 |
| ·HSP70 3’末端PCR扩增及克隆 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-63页 |
| ·总RNA提取与HSP70中间片段的克隆 | 第53-54页 |
| ·HSP70 5’和3’末端序列的克隆 | 第54-55页 |
| ·5’末端序列的克隆 | 第54页 |
| ·3’末端序列的克隆 | 第54-55页 |
| ·生物信息学分析 | 第55-63页 |
| ·HSP70基因cDNA序列分析 | 第55-57页 |
| ·基因推导蛋白的分析 | 第57-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第三节 唐鱼热休克蛋白90基因cDNA全长的克隆及生物信息学分析 | 第65-82页 |
| 1 材料与方法 | 第65-68页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·总RNA提取 | 第65页 |
| ·cDNA模板制备 | 第65-66页 |
| ·引物的设计 | 第66-67页 |
| ·HSP90中间片段扩增及克隆 | 第67页 |
| ·HSP90 5’末端PCR扩增及克隆 | 第67-68页 |
| ·HSP90 3’末端PCR扩增及克隆 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-80页 |
| ·总RNA提取与HSP90中间片段的克隆 | 第68-69页 |
| ·HSP90 5’和3’末端序列的克隆 | 第69-70页 |
| ·5’末端序列的克隆 | 第69页 |
| ·3’末端序列的克隆 | 第69-70页 |
| ·生物信息学分析 | 第70-80页 |
| ·HSP90基因cDNA序列分析 | 第70-72页 |
| ·基因推导蛋白的分析 | 第72-80页 |
| 3 讨论 | 第80-82页 |
| 第二章 唐鱼热休克蛋白基因mRNA组织差异性表达分析 | 第82-93页 |
| 1 材料与方法 | 第82-85页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·实验动物 | 第82页 |
| ·实验试剂 | 第82页 |
| ·实验仪器 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83-85页 |
| ·总RNA提取 | 第83页 |
| ·DNase Ⅰ处理总RNA | 第83页 |
| ·cDNA合成 | 第83-84页 |
| ·特异性引物的设计 | 第84页 |
| ·荧光定量PCR | 第84-85页 |
| ·数据处理 | 第85页 |
| 2 结果与分析 | 第85-90页 |
| ·基因组DNA的去除 | 第85-86页 |
| ·特异性引物的筛选 | 第86页 |
| ·唐鱼HSP60基因的组织特异性表达 | 第86-88页 |
| ·唐鱼HSP70基因的组织特异性表达 | 第88-89页 |
| ·唐鱼HSP90基因的组织特异性表达 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-93页 |
| ·β-actin基因稳定性检测 | 第90-91页 |
| ·唐鱼热休克蛋白基因mRNA组织表达差异 | 第91-93页 |
| 第三章 重金属暴露对其mRNA表达的影响 | 第93-102页 |
| 1 材料与方法 | 第93-95页 |
| ·实验材料 | 第93-94页 |
| ·实验药品 | 第94页 |
| ·实验方法 | 第94-95页 |
| ·唐鱼重金属暴露处理 | 第94页 |
| ·肝脏和鳃组织取样及总RNA提取 | 第94页 |
| ·Dnase Ⅰ处理总RNA | 第94页 |
| ·cDNA合成 | 第94页 |
| ·荧光定量PCR | 第94-95页 |
| ·数据分析 | 第95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-99页 |
| ·铜暴露下肝脏中热休克蛋白基因的表达情况 | 第95页 |
| ·铜暴露下鳃中热休克蛋白基因的表达情况 | 第95-97页 |
| ·镉暴露下肝脏中基因的表达情况 | 第97页 |
| ·镉暴露下鳃中基因的表达情况 | 第97-99页 |
| 3 讨论 | 第99-102页 |
| ·基因组DNA的消除 | 第99页 |
| ·β-actin基因的验证 | 第99页 |
| ·重金属对唐鱼热休克蛋白基因mRNA表达的影响 | 第99-102页 |
| 参考文献 | 第102-112页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
